申请/专利权人：宁波易赛腾生物科技有限公司

申请日：2020-12-31

公开（公告）日：2024-03-12

公开（公告）号：CN114262688B

主分类号：C12N5/10

分类号：C12N5/10;C12N5/0793;C12Q1/02

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.12#授权;2022.04.19#实质审查的生效;2022.04.01#公开

摘要：本发明涉及一种从非神经细胞转化制备保留发病阶段年龄及病理特征的抑制性中间神经元的方法。本发明的制备方法优化了关键的细胞直接转分化基因组合及调控表达水平的启动子，包装可以高效感染各种年龄供体源细胞的病毒，并采用合适的包被基质促进供体源细胞及转化后的神经细胞贴壁生长，并利用含有可以促进转分化的小分子化合物与生长因子的诱导分化培养液，在10‑14天内经过若干次更换分化培养液后转分化得到大量的抑制性中间神经元，最后经过分离纯化获得高纯度的抑制性中间神经元。

主权项：1.一种从非神经细胞转化制备保留发病期年龄及病理特征的抑制性中间神经元的方法，其包括如下步骤：1构建含有细胞转分化基因组合的病毒载体，并通过转染细胞进行病毒包装，所述细胞转分化基因组合包含以下基因的组合：1选自NGN1、NGN2和ASCL1中的至少一种基因；2选自DLX1、DLX2、DLX5、DLX6、LHX5和LHX6中的至少两种基因；以及任选的3选自SOX4和SOX11中的至少一种基因；2培养供体源细胞，并用经包装的病毒感染经培养的供体源细胞，所述供体源细胞为皮肤成纤维细胞、肺成纤维细胞、包皮成纤维细胞的其中一种；3在诱导分化培养液中诱导所述供体源细胞直接转分化为抑制性中间神经元，所述诱导分化培养液含有促进转分化的小分子化合物以及生长因子的组合，所述促进转分化的小分子化合物包含佛司可林、cAMP、双丁酰环腺苷酸、RA、LDN、SB431542中的至少一种，所述生长因子包含bFGF2、BDNF、GDNF中的至少一种；4分离纯化所得的抑制性中间神经元。

全文数据：

权利要求：

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