申请/专利权人：华北制药金坦生物技术股份有限公司

申请日：2022-12-07

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN116768985B

主分类号：C07K14/08

分类号：C07K14/08;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18;C07K1/16

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.22#授权;2023.10.10#实质审查的生效;2023.09.19#公开

摘要：本发明提供了一种有效纯化病毒样颗粒的方法。本发明所提供的方法重点包括两步，其中一步是采用内部孔径比所需纯化的病毒样颗粒直径小的小孔阴离子层析介质进行层析，另一步是采用内部孔径为所需纯化的病毒样颗粒直径2‑8倍的大孔阴离子层析介质进行层析。通过本发明中方法可以有效去除常规吸附洗脱层析中难以去除干净的与目的蛋白等电点接近、携带电荷量相近的小分子宿主蛋白、酶、核酸、VP1单体、VP1截短蛋白，减少最终产品中杂质的含量。且本发明还可以去除带负电量强于目的蛋白病毒样颗粒的大部分杂质，明显提高后续层析对目的蛋白病毒样颗粒的载量。本发明方法具有成本低、杂质载量高、样品处理量大的特点。

主权项：1.一种纯化病毒样颗粒的方法，其特征是，包括如下步骤：a、对样品进行粗纯预处理；样品为诺如病毒样颗粒；b、将粗纯预处理后的样品负染色，使用透射电镜检测，查找并检测所需纯化的病毒样颗粒的直径；c、将缓冲液及上样液pH调节至高于病毒样颗粒等电点1-2.5个pH；d、采用内部孔径比所需纯化的病毒样颗粒直径小的小孔阴离子层析介质进行流穿模式层析；e、采用内部孔径为所需纯化的病毒样颗粒直径2-8倍的大孔阴离子层析介质进行吸附洗脱模式层析；f、对步骤e中收集的层析液进行分子筛层析；g、对分子筛层析后收集的层析液进行透析或超滤换盐，将目的蛋白的缓冲液置换到适合储存的稳定体系；步骤c中所述缓冲液为磷酸盐缓冲液或Tris-HCl缓冲液；步骤d中所述小孔阴离子层析介质其基体是Source30或SepharoseXL，所用配基为季氨基；步骤e中所述大孔阴离子层析介质其基体为DEAE-AP-280、DEAE-AP-120或POROS基体中的任意一种，所用配基为季氨基。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 华北制药金坦生物技术股份有限公司 一种有效纯化病毒样颗粒的方法

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