申请/专利权人：合曜生物科技(南京)有限公司

申请日：2023-07-14

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN116855523B

主分类号：C12N15/81

分类号：C12N15/81;C12N15/52;C12P13/04;C12N1/19;C12N15/53;C12N15/54;C12N15/60;C12N15/31;C12R1/645

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.22#授权;2023.10.27#实质审查的生效;2023.10.10#公开

摘要：本发明公开了一种高产依克多因的圆红冬孢酵母工程菌及其构建方法与应用。所述方法包括如下步骤：敲除圆红冬孢酵母中CAR2基因且异源表达伸长盐单胞菌来源的ectB、ectA和ectC基因；进一步的，所述方法还包括过表达L‑谷氨酸脱氢酶基因GDH2的步骤；更进一步的，所述方法还包括过表达丙酮酸羧化酶基因PYC、L‑天冬氨酸:2‑酮戊二酸转氨酶基因AAT2和或L‑天冬氨酸4‑磷酸转移酶基因HOM3的步骤。通过实验表明：本发明构建的高效生产依克多因的圆红冬孢酵母工程菌株的依克多因产量最高可达62.1gL，对于依克多因工业生产来说，将产生巨大的经济效益，具有重大的推广应用价值。

主权项：1.一种产依克多因重组菌的构建方法，包括如下步骤：降低圆红冬孢酵母中CAR2蛋白的含量和或活性，且提高所述圆红冬孢酵母中伸长盐单胞菌来源的EctB蛋白、EctA蛋白和EctC蛋白的含量和或活性，且提高所述圆红冬孢酵母中L-谷氨酸脱氢酶GDH2的含量和或活性，且提高所述圆红冬孢酵母中丙酮酸羧化酶PYC的含量和或活性，且提高所述圆红冬孢酵母中L-天冬氨酸:2-酮戊二酸转氨酶AAT2的含量和或活性；且提高所述圆红冬孢酵母中L-天冬氨酸4-磷酸转移酶HOM3的含量和或活性；所述EctB蛋白为由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；所述EctA蛋白为由序列表中序列3所示的氨基酸序列组成的蛋白质；所述EctC蛋白为由序列表中序列5所示的氨基酸序列组成的蛋白质；所述CAR2蛋白为由序列表中序列24所示的氨基酸序列组成的蛋白质；所述L-谷氨酸脱氢酶GDH2为由序列表中序列11所示的氨基酸序列组成的蛋白质；所述丙酮酸羧化酶PYC为由序列表中序列14所示的氨基酸序列组成的蛋白质；所述L-天冬氨酸:2-酮戊二酸转氨酶AAT2为由序列表中序列18所示的氨基酸序列组成的蛋白质；所述L-天冬氨酸4-磷酸转移酶HOM3为由序列表中序列21所示的氨基酸序列组成的蛋白质。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 合曜生物科技(南京)有限公司 一种高产依克多因的圆红冬孢酵母工程菌及其构建方法与应用

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