申请/专利权人：山东第一医科大学(山东省医学科学院)

申请日：2024-01-03

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN117487937B

主分类号：C12Q1/6888

分类号：C12Q1/6888;G16B40/30;C12Q1/6851

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.22#授权;2024.02.23#实质审查的生效;2024.02.02#公开

摘要：本发明提供了miRNA标志物组合在制备预测年龄产品中的应用，属于基因工程诊断技术领域。本发明对牙齿样本开发了miRNA提取和荧光定量PCR方法，经上述方法分别得出miR‑22‑3p和miR‑29a‑3p的相对表达量，以kNN模型分析出miR‑22‑3p和miR‑29a‑3p的相对表达量与预测年龄的对应关系，得出样本的预测年龄。本发明应用方法具有高检测灵敏度的特点，仅需要0.05ng的牙齿miRNA即可实现年龄预测，能够对20~70岁人群的牙齿样本进行年龄预测，误差在4.5岁以内。

主权项：1.一种利用miRNA标志物组合预测年龄的方法，其特征在于，所述miRNA标志物组合为牙齿中的miR-22-3p和miR-29a-3p；所述利用miRNA标志物组合预测年龄的方法包括如下步骤：（1）将牙齿粉碎，取牙髓，提取牙髓中的miRNA，反转录得cDNA；（2）对获得的cDNA进行PCR扩增，计算得Ct值，以U6作为内参，以公式△Ct样本=CtmiR-22-3p或miR-29a-3p-CtU6计算得出△Ct样本；（3）以20~30年龄段样品作为对照组，按照步骤（1）和（2）方法计算出△Ct对照；（4）根据基因相对表达量=2-（△Ct样本-△Ct对照）计算出miR-22-3p或miR-29a-3p的相对表达量；（5）基于miR-22-3p和miR-29a-3p的相对表达量用kNN模型进行数据分析，得出预测年龄；所述步骤（1）中对牙髓的处理步骤包括：于牙髓中加入0.5~1.5mL裂解液和8~12μL蛋白酶k，加热震荡1.5~3.5h；所述步骤（1）中进行反转录时，miRNA浓度定为480~520µgL；所述步骤（5）中的具体步骤包括：将步骤（4）计算出的miR-22-3p和miR-29a-3p相对表达量，输入至kNN模型数据库中，设定利用kNN进行数据拟合参数为邻居数：5，度量：欧几里得度量，权重：统一，即可得出预测年龄；所述kNN模型基于Orange软件和训练集中miR-22-3p和miR-29a-3p基因相对表达量和实际年龄构建得到。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 山东第一医科大学(山东省医学科学院) miRNA标志物组合在制备预测年龄产品中的应用

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