申请/专利权人：南京农业大学

申请日：2022-05-31

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN114807198B

主分类号：C12N15/66

分类号：C12N15/66;C12N15/84;C12N15/54;C12N15/56;A01H6/82;A01H5/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.22#授权;2022.08.16#实质审查的生效;2022.07.29#公开

摘要：本发明提供了一种带有可视化蛋白融合抗生素筛选标记的CRISPRCas9载体及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。通过将抗生素筛选标记和可视化蛋白进行融合，由同一个启动子驱动，成功构建了一种载体大小更小、转化率更高的新的带有可视化蛋白标记的CRISPRCas9载体，并成功将该CRISPRCas9载体用于构建了番茄SlD14基因的基因编辑载体，最终培育出表型与野生番茄表型明显不同的转基因番茄植株，证明了该CRISPRCas9载体的有效性。

主权项：1.一种带有可视化蛋白融合抗生素筛选标记的CRISPRCas9载体在构建矮化和分枝增多表型的番茄植株的应用，其特征在于，将所述带有可视化蛋白融合抗生素筛选标记的CRISPRCas9载体用于构建番茄SlD14基因的基因编辑载体，构建方法包括：P1、在SlD14基因的外显子上设计如SEQIDNo.7和SEQIDNo.8所示的2个靶序列；P2、合成如SEQIDNo.9所示的sgRNA序列，将其插入到所述带有可视化蛋白融合抗生素筛选标记的CRISPRCas9载体的SbfI和SmaI酶切位点之间，得到所述番茄SlD14基因的基因编辑载体；所述sgRNA序列包含AtU3d和AtU3b启动子以及2个所述靶序列；所述带有可视化蛋白融合抗生素筛选标记的CRISPRCas9载体的序列如SEQIDNo.1所示；所述番茄SlD14基因的核苷酸序列如SEQIDNo.6所示。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 南京农业大学 带有可视化蛋白融合抗生素筛选标记的CRISPR/Cas9载体及其构建方法和应用

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