申请/专利权人：干细胞转化研究中心有限公司

申请日：2021-09-07

公开（公告）日：2024-03-29

公开（公告）号：CN113897363B

主分类号：C12N15/113

分类号：C12N15/113;C12N15/85;C12N15/55;C12N5/10;C12Q1/02

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.29#授权;2022.01.25#实质审查的生效;2022.01.07#公开

摘要：本发明公开了一种敲除多能干细胞中ACE2基因的方法，包括采用一对核苷酸序列如SEQIDNo.5～8所示的sgRNA，分别克隆到质粒载体上后，与Cas9质粒共转染多能干细胞。本发明还公开了该敲除方法所采用的一对sgRNA、质粒与成套质粒，一种敲除ACE2基因的胚胎干细胞细胞亚系的构建方法，以及一种敲除ACE2基因的人源分化细胞模型的建立方法。本发明在多能干细胞上的双gRNA敲除方法具有敲除效率高、容易操作的优点。基于该敲除方法所构建的胚胎干细胞细胞亚系可发展为任意免于新冠病毒侵染的人源性细胞组织类器官模型，在研究治疗新冠病毒的药物和疫苗研发等方面具有极为重要的意义。

主权项：1.一种敲除ACE2基因的胚胎干细胞细胞亚系的构建方法，其特征在于，采用CRISPRCas9技术构建敲除ACE2基因的胚胎干细胞细胞亚系，所述构建方法包括：采用一对核苷酸序列如SEQIDNo.5~8所示的sgRNA，分别克隆到gRNA质粒载体上后，与Cas9质粒共转染人源扩展潜能干细胞，得到重组细胞，将所述重组细胞培养后得到敲除ACE2基因的胚胎干细胞细胞亚系；所述敲除ACE2基因的胚胎干细胞细胞亚系用于下述（1）~（4）任一项中的应用：（1）在建立敲除ACE2基因的人源分化细胞模型中的应用；（2）在建立干细胞诱导的抗COVID-19的类器官中的应用；（3）在制备敲除ACE2基因的胚胎干细胞细胞亚系的外泌体的应用；（4）制备、筛选、评价抗COVID-19的药物中的应用。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 干细胞转化研究中心有限公司 敲除ACE2基因的胚胎干细胞细胞亚系、构建方法及其应用

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