申请/专利权人：南京大学

申请日：2024-02-07

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN117802211A

主分类号：C12Q1/6869

分类号：C12Q1/6869;C12N15/11

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.19#实质审查的生效;2024.04.02#公开

摘要：本发明公开了一种基于链终止原理的自动化非天然核酸Sanger测序方法。本发明方法通过将DNA测序酶中的有益突变引入同源XNA逆转录酶的活性口袋，得到了可以同时高效兼容XNA待测序链和ddNTP的XNA测序工具酶BstF710Y；相较于野生型，该XNA测序工具酶对ddNTP的表观一级延伸速率提升了两个数量级，达到了和天然dNTP相同的掺入速率；利用其作为XNA测序工具酶，建立XNA的Sanger测序方法，对XNA的连续测序长度突破了50个碱基；该XNA测序方法兼容BigDye修饰的ddNTP，测序产物可被DNA测序仪自动化分析读取。这一发明为未来功能性XNA的筛选和表征，以及基于XNA的数据存储系统的开发奠定了基础。

主权项：1.一种基于链终止原理的自动化非天然核酸Sanger测序方法，其特征在于，包括以下步骤：1制备非天然核酸测序酶：将DNA测序酶中的有益突变引入XNA逆转录酶同源位点，得到XNA逆转录酶变体；对XNA逆转录酶变体进行表征、评估XNA逆转录酶变体对四种BigDye修饰ddNTP的兼容效果，如果该XNA逆转录酶变体对ddNTP的延伸速率与天然的dNTP一致，能在XNA的逆转录过程中随机高保真地掺入ddNTP造成延伸终止，且在一小时内能将四种BigDye修饰ddNTP全部连接到引物上，则确定其可作为XNA测序酶；2用非天然核酸待测序链和XNA测序酶配置非天然核酸的Sanger测序反应体系，混合均匀，梯度退火，恒温孵育，反应结束使用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳或DNA测序仪测序。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 南京大学 一种基于链终止原理的自动化非天然核酸Sanger测序方法

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