申请/专利权人：上海交通大学重庆研究院

申请日：2023-12-13

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN117802155A

主分类号：C12N15/84

分类号：C12N15/84;A01H6/88;A01H5/00

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.19#实质审查的生效;2024.04.02#公开

摘要：本发明涉及植物分子生物学领域，具体涉及一种葡萄叶片瞬时转化方法。本发明优势在于1、相比于传统的组织培养的组织和离体叶片或者叶盘，活体幼苗叶片转化方法，可以实现对幼苗整株的瞬时转化，减少机械损伤，避免叶片死亡。2、使用更高的负压、采用新型的转化缓冲液用于转化，可以更加高效的完成对从幼嫩到成熟叶片的瞬时转化，使其可以转化整株不同生长状态下的叶片。3、采用活体材料表达外源基因，外源基因的表达随着农杆菌与植株的充分浸染，外源基因的表达强度和表达面积更加广泛，并且活体植株保存更加容易和适合长时间保持。

主权项：1.一种葡萄叶片瞬时转化方法，其特征在于，包括如下步骤：1葡萄幼苗驯化；2转化菌液配制；①携带有外源基因质粒的根癌农杆菌培养过夜；②按照1：10-20体积比扩大培养6-8小时，至菌液呈现橙黄色；③室温下，离心，去除上清菌液，收集菌体；④配制转化缓冲液，所述转化缓冲液包括SilwetL77；⑤转化缓冲液重悬菌体，离心，去除上清菌液，收集菌体；⑥使用转化缓冲液重悬菌体并调节OD600＝0.4-0.6；⑦将菌液倒入塑料离心管中；3葡萄叶片瞬时转化；①将修剪后的幼苗叶片轻轻卷曲后浸没入放入步骤2的塑料离心管的菌液中，真空泵连接真空室；②持续抽真空至液体表面出现类似沸腾的现象，停止抽真空，保持一段时间后，放气；③叶片呈现透明状态，使用清水清洗；④葡萄植株尽快放于带盖子的培养盒中；⑤之后去除盖子正常培养。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 上海交通大学重庆研究院 一种葡萄叶片瞬时转化方法

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