申请/专利权人：中国石油化工股份有限公司;中石化安全工程研究院有限公司;中石化国家石化项目风险评估技术中心有限公司

申请日：2022-10-08

公开（公告）日：2024-04-09

公开（公告）号：CN117844915A

主分类号：C12Q1/6883

分类号：C12Q1/6883;C12Q1/6851;C12Q1/02;C12N15/11

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.26#实质审查的生效;2024.04.09#公开

摘要：本发明涉及生物毒性检测领域，公开了一种利用斑马鱼PCR芯片检测生物毒性效应的方法，包括：1S1：将4‑128细胞期斑马鱼胚胎进行培养，并记录培养数据，收集存活的胚胎，提取存活的胚胎的mRNA，并且反转录得到cDNA；或S2：将4‑128细胞期斑马鱼胚胎进行培养，然后进行孵化，并记录培养数据和孵化数据，收集存活的胚胎和仔鱼；提取存活的胚胎和仔鱼的mRNA，并且反转录得到cDNA；2以cDNA为模板，使用斑马鱼PCR芯片进行RT‑qPCR反应，得到CT值；3根据CT值计算目的基因相对于内参基因的相对表达倍数，分析得到毒性通路和毒性终点；4根据相对表达倍数绘制基因表达热图，判断实验组的毒性组分以及毒性来源。本发明的方法可以对污染物生态毒性进行综合评价。

主权项：1.一种利用斑马鱼PCR芯片检测生物毒性效应的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1S1：将4-128细胞期斑马鱼胚胎置于实验组溶液、阳性对照组溶液和空白对照组溶液中进行培养，并记录培养数据，收集存活的胚胎，提取存活的胚胎的mRNA，并且反转录得到cDNA；或S2：将4-128细胞期斑马鱼胚胎置于实验组溶液、阳性对照组溶液和空白对照组溶液中进行培养，然后进行孵化，并记录培养数据和孵化数据，收集存活的胚胎和仔鱼；提取存活的胚胎和仔鱼的mRNA，并且反转录得到cDNA；2以步骤1得到的cDNA为模板，使用斑马鱼PCR芯片进行RT-qPCR反应，得到CT值；3根据CT值计算目的基因相对于内参基因的相对表达倍数，然后根据基因差异化表达水平结合基因所属类别分析得到毒性通路和毒性终点，利用步骤1记录的数据，分析得到对斑马鱼胚胎的表观毒性大小；4根据步骤3中的相对表达倍数绘制基因表达热图，并进行均一化处理和聚类分析，根据分析结果判断实验组的毒性组分以及毒性来源；其中，所述斑马鱼PCR芯片包括24对特异性引物，每对特异性引物分别包括一个上游引物和一个下游引物，24对引物的序列如SEQIDNO.1～SEQIDNO.48所示。

全文数据：

权利要求：

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