申请/专利权人：广东省林业科学研究院

申请日：2021-11-19

公开（公告）日：2024-04-05

公开（公告）号：CN114107374B

主分类号：C12N15/84

分类号：C12N15/84;C12N15/53;C12N15/61;C12N15/54;A01H5/00;A01H6/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.05#授权;2022.03.18#实质审查的生效;2022.03.01#公开

摘要：本发明公开了一种鸢尾科植物红葱VIGS沉默体系的构建方法及其应用。本发明以烟草脆裂病毒TRV作为VIGS体系的载体，以红葱八氢番茄红素脱氢酶基因作为目的基因，利用真空渗透处理方法成功创建了适合红葱的VIGS沉默体系；将该体系应用于开展红葱色素合成相关基因EbMYB5和EbMYB52基因功能研究，被侵染的沉默处理组样品叶片中EbMYB5、EbMYB52基因表达量显著降低，且与色素合成途径相关的关键基因表达量呈现出不同程度的显著变化，表明本发明的红葱VIGS沉默体系可以成功应用于红葱基因功能验证。本发明构建的红葱VIGS沉默体系对于红葱基因功能研究具有重要意义。

主权项：1.一种红葱VIGS沉默体系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：a.将红葱目的基因特异性片段连接至pTRV2载体的多克隆位点上，获得pTRV2-目的基因特异性片段重组质粒，将重组质粒转化农杆菌，获得pTRV2-目的基因特异性片段农杆菌，培养收集菌体备用；b.用缓冲液分别将pTRV1农杆菌、pTRV2-目的基因特异性片段农杆菌的菌体重悬分散制成农杆菌菌液，然后将OD600=1的pTRV1农杆菌菌液与pTRV2-目的基因特异性片段农杆菌菌液按体积比1：1混合为侵染液；所述的缓冲液含有10mMMES、200µM乙酰丁香酮和10mMMgCl2，余量为水，pH5.6；c.将6~8个月生长期红葱植株洗净，吸干表面水分，完全浸泡于侵染液中，进行真空渗透处理；所述的真空渗透处理为：于真空渗透装置中，在真空度到达0.5~0.7atm后，保持30s，随后缓慢放气恢复正常气压；然后重复上述步骤一次；d.用无菌水清洗植株上多余的侵染液，然后将植株于20℃下黑暗培养24h，25℃黑暗条件下平衡24h，随后正常培养，构建得到红葱的目的基因VIGS沉默体系。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 广东省林业科学研究院 一种鸢尾科植物红葱VIGS沉默体系的构建方法及其应用

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