申请/专利权人：通用生物(南京)有限公司

申请日：2024-02-28

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN117866919A

主分类号：C12N9/12

分类号：C12N9/12;C12N15/70;C12N15/54;C12N1/21;C12R1/19

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.30#实质审查的生效;2024.04.12#公开

摘要：本发明公开了一种高扩增活性突变型PfuDNA聚合酶，属于基因工程技术领域，从如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列中筛选出突变位点进行突变，反向翻译，基因合成得到模板，然后进行PCR扩增，将PCR产物和线性化载体无缝克隆，抽提质粒，构建出突变型PfuDNA聚合酶的表达载体并转化到感受态细胞中，扩大培养并收集菌体，低温破碎，离心，收集上清液，磁珠纯化，洗脱，收集纯化后的蛋白，得到突变型PfuDNA聚合酶；突变型PfuDNA聚合酶具有逆转录活性，可以在PCR过程中同时进行转录和扩增，可以省去额外的逆转录步骤，具有较高的扩增活性，有助于提高扩增效率。

主权项：1.一种高扩增活性突变型PfuDNA聚合酶，其特征在于，通过如下步骤制备：步骤一：从如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列中筛选出突变位点进行突变，反向翻译，得到如SEQIDNO.3所示的突变型PfuDNA聚合酶的多核苷酸序列；步骤二：根据突变型PfuDNA聚合酶的多核苷酸序列设计PFu引物，将突变型PfuDNA聚合酶的多核苷酸序列基因合成得到模板，然后进行PCR扩增，将pET23a载体线性化得到线性化载体，将PCR产物和线性化载体无缝克隆，菌落PCR验证正确抽提质粒，构建出突变型PfuDNA聚合酶的表达载体；步骤三：将突变型PfuDNA聚合酶的表达载体转化到大肠杆菌感受态细胞中，扩大培养并收集菌体，低温破碎，离心，收集上清液，磁珠纯化，洗脱，收集纯化后的蛋白，得到突变型PfuDNA聚合酶。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 通用生物(南京)有限公司 一种高扩增活性突变型Pfu DNA聚合酶

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