申请/专利权人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院

申请日：2023-08-14

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN116990415B

主分类号：G01N30/02

分类号：G01N30/02;G01N30/06;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.12#授权;2023.11.21#实质审查的生效;2023.11.03#公开

摘要：本发明公开了一种贝肉中典型麻痹性贝类毒素的非靶向筛查方法，本发明首次基于麻痹性贝类毒素特征碎片离子提取技术建立了一种不同类型麻痹性贝类毒素的超高效液相色谱‑高分辨质谱检测方法，所述方法通过提取麻痹性贝类毒素高分辨特征碎片离子，实现样品中典型麻痹性贝类毒素的快速锁定，结合标准品二级质谱比对，最终实现麻痹性贝类毒素的非靶向筛查和准确鉴定，在食品安全领域具有广阔的应用前景。

主权项：1.一种贝肉中典型麻痹性贝类毒素的非靶向筛查方法，其特征在于，所述筛查方法包括如下步骤：1溶剂提取：取贝肉样品，绞碎，称取1.0±0.02g样品，加入5.0mL35%ACN0.1%甲酸水溶液，涡旋振荡、超声、离心得到提取上清液；2固相萃取：取步骤1中得到的提取上清液1.0mL，离心浓缩至干，使用1.0mL甲酸铵复溶得到待净化样品，分别用3.0mL乙腈水乙酸溶液、3.0mL甲酸铵平衡SupercleanEnvi-CardSPE柱，所述待净化样品以自然流速过柱，用2.0mL甲酸铵和1.0mL甲醇洗涤SPE柱，最后用1.0mL乙腈水乙酸溶液洗脱，收集洗脱液1.0mL，离心浓缩至干，用100μL乙腈水溶液复溶，离心后得到待测上清液；3超高效液相色谱-高分辨质谱检测：采用超高效液相色谱-高分辨质谱仪对步骤2中得到的待测上清液进行检测，所述超高效液相色谱-高分辨质谱仪的参数如下：色谱条件：ACQUITYBEHamide色谱柱，柱温35°C，进样量5μL，流速0.3mLmin，进样体积2μL，流动相A为含0.16%甲酸和10mM甲酸铵的水溶液，流动相B为乙腈，洗脱方式为梯度洗脱，梯度洗脱程序为：0~1.0min，98%流动相B，1.0~20min，降低至50%流动相B，20~25min，保持50%流动相B，25~26min，升至98%流动相B，26~30min，保持98%流动相B；质谱条件：电喷雾离子源（ESI+），毛细管电压为3.2kV；雾化气温度为350℃；离子传输管温度为325℃；鞘气压力为40arb；辅助气压力为5arb；质谱扫描方法为全扫描结合非靶向数据依赖二级质谱扫描模式；一级全扫描参数：扫描范围为mz100-700，质谱分辨率为60000；二级ddMS2扫描参数：选择一级质谱中响应前10的离子作为二级MSMS采集的前体离子，前体离子隔离窗口为mz1.5，阶梯式归一化碰撞能量选择40，45，55，60以及65V，二级质谱分辨率为15000，色谱峰宽设置为10s，顶点触发选择30%；所述典型麻痹性贝类毒素包括麻痹性贝类毒素、麻痹性贝类毒素类似物；所述麻痹性贝类毒素包括STX、NEO、GTX1、GTX4、GTX2、GTX3、GTX5、GTX6、C1、C2、dcSTX、dcNEO、dcGTX2、dcGTX3。

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