申请/专利权人：云南省林业和草原科学院

申请日：2020-03-26

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN111334510B

主分类号：C12N15/113

分类号：C12N15/113;A01N57/16;A01P7/04

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.12#授权;2020.07.21#实质审查的生效;2020.06.26#公开

摘要：本发明属于农业生物技术领域，具体涉及一种用于干扰桔小实蝇Flightin基因的RNAi干扰片段制备及其使用方法，制备方法为，选取桔小实蝇Flightin基因部分序列，设计干扰引物，进行模板DNA的扩增，以扩增产物为模板合成dsRNA，纯化得到浓度和纯度俱佳的RNAi干扰产物，选用物质的量的浓度为1000ngμl的RNAi干扰产物，分别在桔小实蝇蛹后期或刚羽化两个时期，通过显微注射完成摄入，本发明实施的技术方案干扰桔小实蝇Flightin基因的效果显著，为安全、高效的生物防治提供了新的防治方法。

主权项：1.如SEQIDNO.1所述的序列制备的RNAi干扰片段在下调桔小实蝇Flightin基因中的应用，其特征在于，所述应用步骤如下：（1）采用桔小实蝇Flightin基因的序列SEQIDNO.1；（2）设计步骤（1）中所述序列的PCR扩增引物的5’端，分别加上T7启动子序列，得到上游引物序列为TAATACGACTCACTATAGGGACTCGTATAATGGCTGATG，下游引物序列为TAATACGACTCACTATAGGGATAGCGACAAGCTCCCAC；（3）使用步骤（2）中的引物PCR扩增，获得DNA片段，利用体外转录试剂盒合成dsRNA；（4）将步骤（3）中合成的产物进行纯化、干燥；（5）将干燥的RNA产物，用50μl无核酸酶水溶解RNA沉淀，室温静置5min；获得最终使用的RNAi干扰片段产物，于-80℃保存待用；所述RNAi干扰片段产物，解冻后，调整浓度为1000ngμl，使用显微注射方式分别于桔小实蝇成长的蛹后期注入其体内。

全文数据：

权利要求：

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