申请/专利权人：河南农业大学

申请日：2024-01-19

公开（公告）日：2024-04-16

公开（公告）号：CN117890585A

主分类号：G01N33/569

分类号：G01N33/569;G01N33/543;G01N33/577;G01N33/531

优先权：

专利状态码：在审-公开

法律状态：2024.04.16#公开

摘要：本申请属动物疫病检测技术领域，具体涉及一种非洲猪瘟检测用双探针及相应的ELSIA检测方法。本申请中，发明人构建了两种探针，其中MNPs‑p30探针是通过使用EDC和NHC活化MNPs上的羧基以形成活化酯溶液，进而与p30蛋白上的氨基反应后偶联复合形成为一个整体；McAb‑HRP探针则是将抗p30的单克隆抗体与HRP偶联复合为一个整体。基于这两种探针，发明人构建了一种适于ASFV检测的双探针竞争性ELISA检测方法。实验结果表明，本申请所提供的ELISA检测方法具有灵敏度高、准确度高、可重复性好等优点，尤其是可大幅简化相关操作步骤，且可大幅缩短检测时间，可为ASF的防控奠定良好的技术基础。

主权项：1.非洲猪瘟检测用双探针，其特征在于，所述双探针通过如下步骤制备获得：一磁性纳米粒子MNPs与p30偶联复合将磁性纳米粒子MNPs与p30蛋白偶联复合制备获得MNPs-p30探针；具体制备步骤如下：将MNPs悬浮于MES溶液中，加入EDC和NHC，室温反应，以活化MNPs上的羧基；活化完成后，磁力分离，将羧基活化后的MNPs重悬于MES溶液中；加入p30蛋白，室温下振荡孵育偶联复；孵育结束后，洗涤MNPs；洗涤完成后，加入含BSA的PBST缓冲液，室温孵育，以阻断MNPs上的未结合位点；阻断反应完成后，利用PBST缓冲溶液洗涤上述偶联复合完成的MNPs-p30探针，并最后重悬于PBST缓冲溶液中保存备用；二抗p30单抗McAb与HRP偶联复合首先，制备抗p30的单抗McAb，然后，将所制备单抗与HRP偶联复合，制备获得McAb-HRP探针。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 河南农业大学 非洲猪瘟检测用双探针及相应的ELSIA检测方法

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