申请/专利权人：美纳里尼硅生物系统股份公司

申请日：2018-07-20

公开（公告）日：2024-04-16

公开（公告）号：CN110959045B

主分类号：C12Q1/6869

分类号：C12Q1/6869;C40B50/06

优先权：["20170721 EP 17182693.6"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.16#授权;2020.07.03#实质审查的生效;2020.04.03#公开

摘要：公开了一种生成大规模平行测序文库的方法，其包括以下步骤：a提供基本WGADNA文库pWGAlib，所述基本WGADNA文库包括含有WGA文库通用序列衔接子的片段；b使用第一引物1PR对pWGAlib进行单个PCR，所述第一引物1PR从5'到3'包括第一测序衔接子1PR5SA和第一引物3'区段1PR3S，所述第一引物3'区段1PR3S与所述WGA文库通用序列衔接子的反向互补序列杂交；c使用第二引物2PR对步骤b的产物进行单个PCR，所述第二引物2PR从5'到3'包括与1PR5SA不同的第二测序衔接子2PR5SA和第二引物3'区段2PR3S，所述第二引物3'区段2PR3S与WGA文库通用序列衔接子的反向互补序列杂交；d使用包含所述1PR5SA的第三引物和包含所述2PR5SA的第四引物通过PCR扩增步骤c的产物。

主权项：1.一种生成大规模平行测序文库的方法，包括以下步骤：a.提供基本WGADNA文库pWGAlib，所述基本WGADNA文库pWGAlib包括含有已知的5'序列区段5SS、中间序列区段MSS和与所述已知的5'序列区段反向互补的已知的3'序列区段3SS的片段，所述已知的5'序列区段5SS包括WGA文库通用序列衔接子，所述中间序列区段MSS至少包括插入区段IS，所述插入区段IS与WGA之前的原始未扩增DNA的DNA序列对应，所述中间序列区段MSS任选地另外包括侧翼5'中间区段F5和或侧翼3'中间区段F3；b.使用至少一种第一引物1PR对基本WGADNA文库进行单个PCR循环，所述第一引物1PR至少包括第一引物5'区段1PR5S和第一引物3'区段1PR3S，所述第一引物5'区段1PR5S包含至少一个第一测序衔接子1PR5SA，所述第一引物3'区段1PR3S与所述已知的3'序列区段3SS杂交，从而获得第一引物延伸的WGADNA文库；c.使用至少一个第二引物2PR对所述第一引物延伸的WGADNA文库进行单个PCR循环，所述第二引物2PR包括第二引物5'区段2PR5S和第二引物3'区段2PR3S，所述第二引物5'区段2PR5S包含与所述至少一个第一测序衔接子1PR5SA不同的至少一个第二测序衔接子2PR5SA，所述第二引物3'区段2PR3S与所述已知的3'序列区段3SS杂交，从而获得第一引物和第二引物延伸的WGADNA文库；d.使用至少一个包含所述第一测序衔接子1PR5SA的第三引物3PR和至少一个包含所述第二测序衔接子2PR5SA的第四引物4PR，通过PCR扩增所述第一引物和第二引物延伸的WGADNA文库，从而获得扩增的第一引物和第二引物延伸的WGADNA文库。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 美纳里尼硅生物系统股份公司 生成大规模平行测序的DNA文库的改进的方法和试剂盒

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