申请/专利权人：北京化工大学

申请日：2024-02-05

公开（公告）日：2024-04-30

公开（公告）号：CN117947011A

主分类号：C12N9/88

分类号：C12N9/88;C12N15/60;C12P13/06

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.05.17#实质审查的生效;2024.04.30#公开

摘要：本发明提供了一种L‑天冬氨酸‑α‑脱羧酶ADC定向进化及用于高效催化L‑天冬氨酸脱羧产生β‑丙氨酸的方法。以枯草芽孢杆菌来源的ADC突变体I88M为模板，结合碳端缺失策略，构建随机突变文库，通过基于荧光法的高通量筛选，确定了4个影响ADC活性和稳定性的关键位点——S7、K63、A99、K113。以突变体K63N为基础，对S7、A99、K113进行饱和突变，并针对氨基酸残基的亲水性和空间位阻设计突变组合，得到2个优势突变体N3S7NK63NI88MA99EK113RI126*和Y1S7YK63NI88MA99EK113RI126*。与野生型相比，N3和Y1催化效率和催化稳定性分别提高了93％‑95％和67％‑89％，催化L‑天冬氨酸脱羧合成β‑丙氨酸转化率超过95％。

主权项：1.一种天冬氨酸-α-脱羧酶定向进化及用于β-丙氨酸合成的方法，其特征在于：以枯草芽孢杆菌来源的天冬氨酸-α-脱羧酶ADC突变体I88M为模板，结合碳端缺失策略，构建突变文库，通过基于荧光法的高通量筛选，确定影响ADC活性和稳定性的关键位点，并对关键位点进行饱和突变，并针对氨基酸残基的亲水性和空间位阻设计突变组合，ADC优势突变体N3将模板氨基酸序列的第7位丝氨酸突变为天冬酰胺、第63位赖氨酸突变为天冬酰胺、第99位丙氨酸突变为谷氨酸、第133位赖氨酸突变为精氨酸。ADC优势突变体Y1将模板氨基酸序列的第7位丝氨酸突变为酪氨酸、第63位赖氨酸突变为天冬酰胺、第99位丙氨酸突变为谷氨酸、第133位赖氨酸突变为精氨酸。

全文数据：

权利要求：

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