申请/专利权人：中国农业科学院农业基因组研究所

申请日：2022-06-29

公开（公告）日：2023-12-19

公开（公告）号：CN115011591B

主分类号：C12N15/10

分类号：C12N15/10;C12N15/113;C12N15/82;A01H5/06;A01H6/14

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.12.19#授权;2022.09.23#实质审查的生效;2022.09.06#公开

摘要：本发明公开了一种用于抑制薇甘菊生长发育的RNAi分子制备方法，本发明采用RNA干扰技术，RNA干扰是植物在长期进化过程中形成的一种重要防御机制，利用RNAi技术去抑制其根系发育可有效的控制薇甘菊的扩散，为生物防治实践中通过RNA干扰技术抑制薇甘菊生长发育能力的靶向防控技术研究提供理论依据；通过筛选出拟南芥中已明确基因AtEXPA4具有与根系发育相关的功能，该基因的主要功能是敲除AtEXPA4基因使主根生长缓慢。利用Blastp比对，以e‑value值e‑5为标准，筛选出基因Mm14G033446作为靶标，并设计了相应的RNAi分子。

主权项：1.靶向Mm14G033446的dsRNA在抑制薇甘菊生长发育中的应用，其特征在于，所述Mm14G033446的序列为ATGGAGGTCAGGGGTGTCGGTTATGCAGCAATTCTGTGTGTTATTTTCACAGTGGTCAACGCTCGTATACCGGGAGTTTACACCGGCGGACAATGGGAGACTGCTCACGCCACCTTCTACGGCGGCAATGATGCCTCCGGCACCATGGGAGGTGCATGTGGGTACGGTAACCTATATAGCCAAGGCTATGGTGTGAATACAGCGGCCTTGAGTACTGCTCTGTTCAACAATGGGCTGAGCTGCGGTGCATGTTTCGAGATTAAGTGTGTGGATGACCCACAGTGGTGCCATCCAGGCAGCCCCTCGATTTTCATAACAGCAACCAACTTCTGTCCACCTAATTTTGCTCAGCCAAGTGATAATGGTGGGTGGTGCAACCCTCCTCGAACCCATTTCGATCTGGCCATGCCTATGTTTCTCAAGATTGCCGAGTATCGAGCCGGAATAGTTCCTGTTTCTTACCGCCGGATCCCATGTCGAAAGCAAGGCGGGGTAAGATTCACCATCAACGGATTCCGTTACTTCAATTTGGTTCTCATCACCAACGTTGCTGGAGCCGGGGACATAACGCAAGCATGGGTGAAAGGATCAAGGACCGAATGGATGAGTCTTAGCCGTAACTGGGGTCAAAACTGGCAATCAAATGTTGTGCTTGTTGGCCAATCACTTTCATTTAGGGTTAGAGGCAGTGATCATCGCACTTCCACATCTTGGAACATTGCCCCAGCTGACTGGAAATTTGGTCAAACCTTTGTCGGGAAAAATTTCCGAGTCTAG所述dsRNA制备步骤如下：S1薇甘菊根系发育基因的筛选；Blastp比对后筛选出的基因：Mm14G033446；identity：84.49；e-value：1.39e-160；S2目的基因的克隆；S2.1总RNA提取:采用福际试剂盒方法提取薇甘菊叶片总RNA，通过紫外分光光度计检测样品RNA纯度，cDNA的合成参照YESEN公司的试剂盒说明书进行；S2.2基因的克隆；根据筛选出基因Mm14G033446的序列，利用引物设计软件PrimerPremier5设计扩增正向引物F:ACTGCTCACGCCACCTTCTAC和反向引R:GACTCATCCATTCGGTCCTTG，对目的片段进行扩增，用pUCm-TVector克隆试剂盒将目的片段与载体连接，并转化入DH5α感受态细胞；S3dsRNA的制备；S3.1PCR扩增：在上述克隆步骤中扩增目的片段引物的5’端加上T7启动子序列作dsRNA合成的扩增引物，合成特异引物，以筛选出的质粒为模板进行PCR扩增；S3.2PCR产物纯化；S3.3dsRNA转录；以上述纯化产物为模板，在PCR管中进行转录；S3.4dsRNA纯化。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国农业科学院农业基因组研究所 一种用于抑制薇甘菊生长发育的RNAi分子制备方法

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD