申请/专利权人：山东省食品药品检验研究院

申请日：2022-03-08

公开（公告）日：2024-01-23

公开（公告）号：CN114577943B

主分类号：G01N30/02

分类号：G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/72

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.01.23#授权;2022.06.21#实质审查的生效;2022.06.03#公开

摘要：本发明公开了一种间接测定婴幼儿配方乳粉及调制乳粉中天冬氨酸和谷氨酸的方法，包括以下步骤：样品中加入灰色链霉菌蛋白酶溶液酶解提取天冬氨酸和谷氨酸，通过AQC衍生；样品中加入盐酸水解提取天冬氨酸和谷氨酸，通过AQC衍生；标准溶液的配制：采用液相色谱‑质谱测定。采用酸水解和创新酶解技术联合，建立了UPLC‑MSMS婴幼儿配方乳粉与调制乳粉品中天冬氨酸与谷氨酸的间接测定方法，为乳粉中天冬氨酸与谷氨酸的准确测定提供技术参考。

主权项：1.一种间接测定婴幼儿配方乳粉及调制乳粉中天冬氨酸和谷氨酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）样品中加入灰色链霉菌蛋白酶溶液酶解提取天冬酰胺和谷氨酰胺，通过AQC衍生；酶解的具体步骤为：样品混匀后称取0.1g于50mL螺纹带盖的离心管中，加入0.5mL10mgmL灰色链霉菌蛋白酶溶液、0.1molL，pH8.5的3.0mLTris缓冲液、200μL甲醇，涡旋混匀，超声20min后，于50℃恒温水浴振荡器中振荡18h~20h，然后将样品置于90℃加热15-20分钟；取出样品，冷却至室温，将试样溶液转移至25mL容量瓶中，用水定容至刻度；充分摇匀后，精确量取100μL至5mL容量瓶中，加入50μL氨基酸混合标准溶液内标，然后用超纯水定容至5mL，经0.22μm有机相微孔滤膜过滤后待用；（2）样品中加入盐酸水解提取天冬氨酸和谷氨酸，通过AQC衍生；（3）标准溶液的配制：标准储备液10.0mmolL：分别准确称取适量标准品于10mL容量瓶中，分别用0.1molL盐酸定容至刻度；标准工作溶液：将以上各标准储备液稀释，配成混合标准溶液，使用前逐级稀释至各组分均为0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、30.0、40.0、50.0、100.0、200.0μmolL的系列标准工作溶液；（4）采用液相色谱-质谱测定：天冬氨酸的含量为步骤（2）中的天冬氨酸的摩尔浓度减去步骤（1）中测得的天冬酰胺的摩尔浓度，计算得出天冬氨酸的含量；谷氨酸的含量为步骤（2）中的谷氨酸的摩尔浓度减去步骤（1）中测得的谷氨酰胺的摩尔浓度，计算得出谷氨酸的含量；液相色谱的条件为：色谱柱：AccQ-TagUltraC18，2.1mm×100mm，1.7µm；流动相：A.10mmolL甲酸铵缓冲溶液、B.乙腈；进样体积1µL；柱温40℃；梯度洗脱程序见表： 。

全文数据：

权利要求：

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