申请/专利权人：中国医学科学院北京协和医院

申请日：2023-11-20

公开（公告）日：2024-02-23

公开（公告）号：CN117269402B

主分类号：G01N30/88

分类号：G01N30/88

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.02.23#授权;2024.01.09#实质审查的生效;2023.12.22#公开

摘要：本发明公开了一种定量检测人脑脊液中诺西那生的液相质谱联用方法,它包括如下步骤：1配制标准曲线工作溶液；2配制内标工作溶液；3配制人脑脊液标准曲线样品；4待测人脑脊液样品及人脑脊液标准曲线样品的处理；5处理后样品分别进行LC‑MSMS分析；6绘制标准曲线，并根据标准曲线法对待测人脑脊液样品中诺西那生的含量进行定量分析。本发明的方法简单、快捷、结果准确，可用于诺西那生的药代动力学研究。

主权项：1.一种定量检测人脑脊液中诺西那生含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：1配制标准曲线工作溶液：精密称取诺西那生对照标准物质，置于低吸附塑料瓶中，加入适量90％二甲基亚砜溶液，制成1.00mgmL的诺西那生标准曲线工作溶液储备液，放置于-10～-30℃冰箱中保存备用；在低吸附塑料瓶中配制诺西那生的标准曲线工作溶液，取诺西那生标准曲线工作溶液储备液加甲醇-血浆-水溶液稀释配制成浓度分别为100，200，400，1000，4000，8000，16000，20000ngmL的标准曲线工作溶液，所述的甲醇-血浆-水溶液为体积比10：0.5：90的甲醇、血浆和水配制；2配制内标工作溶液：取格列吡嗪对照标准物质加入适量90％二甲基亚砜水溶液，配制成格列吡嗪浓度为1.00mgmL内标工作溶液储备液，放置于-10～-30℃冰箱中保存备用；取内标工作溶液储备液用5％甲醇水溶液稀释配制成格列吡嗪浓度为500ngmL的内标工作溶液；所述5％甲醇水溶液为体积比5:95的甲醇和水配制；3配制人脑脊液标准曲线样品：在湿冰条件下使用人脑脊液与步骤1中所述标准曲线工作溶液以适当比例混合配制人脑脊液标准曲线样品，人脑脊液标准曲线样品中诺西那生的浓度分别是2.00、4.00、8.00、20.0、80.0、160、320、400ngmL；4待测人脑脊液样品及人脑脊液标准曲线样品的处理：分别取待测人脑脊液样品及步骤3中配制的人脑脊液标准曲线样品各50μL，在湿冰条件下，分别加入20μL的内标工作溶液，然后再加入50μL含0.5％三乙胺的甲醇水溶液进行稀释，进行涡旋振荡5min、4℃条件下3500g离心1min、分别取上清，即为处理后样品，所述含0.5％三乙胺甲醇水溶液的配制：量取5mL三乙胺加体积比为2：98的甲醇和水配制的甲醇水溶液至1000mL；5处理后样品分别进行LC-MSMS分析：所述LC-MSMS分析的色谱条件如下：色谱柱：WatersXbridgeC18，3.5μm，4.6×50mm；流动相A：含0.5％三乙胺和0.5％六氟异丙醇的水溶液；流动相B：含0.5％三乙胺和0.5％六氟异丙醇的乙腈溶液；强洗针液：0.1％三乙胺溶在甲醇-乙腈-异丙醇-水混合溶液中，所述甲醇-乙腈-异丙醇-水混合溶液为体积比为1：1：1：1的甲醇、乙腈、异丙醇和水配制；弱洗针液：10％甲醇水溶液，所述10％甲醇水溶液为体积比10：90的甲醇和水配制；流速：0.800mLmin；进样量：20μL；洗脱方式为梯度洗脱，梯度洗脱程序如下：0～0.01min，A相为95％，B相为5％；0.01～2.00min，A相从95％降为65％，B相从5％升到35％；2.00～3.00min，A相从65％降为5％，B相从35％升到95％；3.00～3.80min，A相为5％，B相为95％；3.80～3.85min，A相从5％升到95％，B相从95％降为5％；3.85～4.20min，A相为95％，B相为5％；4.20～4.25min，A相从95％降为5％，B相从5％升到95％；4.25～4.60min，A相为5％，B相为95％；4.60～4.65min，A相从5％升到95％，B相从95％降为5％；4.65～5.00min，A相为95％，B相为5％；5.00～5.05min，A相从95％降为5％，B相从5％升到95％；5.05～5.25min，A相为5％，B相为95％；5.25～5.30min，A相从5％升到95％，B相从95％降为5％；所述LC-MSMS分析的质谱条件如下：以高纯氮气作为气帘气、碰撞气，ESI源负离子扫描，多离子反应监测扫描方式；质谱参数：碰撞气：High；气帘气：55psi；离子源气体1：50psi；离子源气体2：50psi；离子喷雾电压：-4500V；温度：550℃；质谱采集时长：6.00min；6绘制标准曲线，并根据标准曲线法对所述待测人脑脊液样品中诺西那生的含量进行定量分析：以所述人脑脊液标准曲线样品中的诺西那生与格列吡嗪的色谱峰峰面积比为纵坐标，以所述人脑脊液标准曲线样品的浓度为横坐标，进行线性回归，得到标准曲线；将所述待测人脑脊液样品中诺西那生与格列吡嗪的色谱峰峰面积比，代入所述标准曲线中计算，即得待测人脑脊液样品中诺西那生的含量。

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