申请/专利权人：四川德博尔制药有限公司

申请日：2023-12-18

公开（公告）日：2024-03-19

公开（公告）号：CN117721099A

主分类号：C12N9/76

分类号：C12N9/76;A61K38/48

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.05#实质审查的生效;2024.03.19#公开

摘要：本发明公开了一种糜蛋白酶的制备方法和应用，涉及生物制药技术领域，依次进行原料预处理、浸提、萃取、活化、超滤、精提、纯化、干燥粉碎，其中精提时向糜蛋白酶粗酶液中加入聚乙烯磺酸钠，搅拌后离心，收集不溶聚合物；向不溶聚合物中加入醋酸缓冲溶液，搅拌均匀后加入聚醚酰亚胺溶液，充分解离，冷冻离心，过滤，并收集沉淀；利用聚乙烯磺酸钠具有的磺酸基带负电荷的基团能够与糜蛋白酶的带正电的组氨酸残基之间发生相互静电作用而形成聚合沉淀物，同时低浓度的聚乙烯亚胺的存在可以破坏两者之间的库仑力作用，使两者相互解离，即通过加入的聚乙烯磺酸钠和聚乙烯亚胺之间的协同作用，使得制备的糜蛋白酶质量更高。

主权项：1.一种糜蛋白酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：原料预处理，使用等渗生理盐水洗涤胰脏后绞碎；步骤2：浸提，向绞碎的胰脏中加入三羟甲基氨基甲烷盐酸盐，搅拌匀浆，得到糜蛋白酶的浸提液；步骤3：萃取，将浸提液萃取后冷冻离心，所得沉淀沉淀用浸提液反复溶解萃取离心，收集所有上清液；步骤4：活化，向收集的上清液中添加氯化钙和胰酶粉，使用碳酸氢钠调节pH值，充分搅拌后得到活化酶液；步骤5：超滤，使用超滤管超滤，将透析液浓缩，得到糜蛋白酶粗酶液；步骤6：精提，向糜蛋白酶粗酶液中加入聚乙烯磺酸钠，搅拌后离心，收集不溶聚合物；向不溶聚合物中加入醋酸缓冲溶液，搅拌均匀后加入聚醚酰亚胺溶液，充分解离，冷冻离心，过滤，并收集沉淀；步骤7：纯化，向沉淀中加入醋酸缓冲溶液，使用层析柱上样吸附，之后进行洗脱，收集含有糜蛋白酶活性峰的洗脱液；步骤8：干燥粉碎，将收集的洗脱液冷冻，真空干燥，粉碎过筛后即得到糜蛋白酶。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 四川德博尔制药有限公司 一种糜蛋白酶的制备方法和应用

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