申请/专利权人：广州金域医学检验集团股份有限公司

申请日：2019-12-05

公开（公告）日：2024-03-19

公开（公告）号：CN110938674B

主分类号：C12Q1/6806

分类号：C12Q1/6806;C12Q1/6869;C40B50/06

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.19#授权;2020.04.24#实质审查的生效;2020.03.31#公开

摘要：本发明涉及一种甲基化测序DNA文库的构建方法，包括：a使用一端带接头的随机引物和或半随机引物扩增重亚硫酸盐处理后的单链DNA，得到同时具有所述接头和所述单链DNA互补链的中间体DNA；其中所述接头具有由衔接物连接在一起的两段测序接头序列，且所述衔接物具有AP位点；b用单链DNA环化连接酶将所述中间体DNA的两端连接得到环化DNA；以及c使用APE酶切割所述环化DNA中的AP位点以去环化。该方法构建的文库多样性好，且基本不影响后续的测序过程。

主权项：1.甲基化测序DNA文库的构建方法，包括：a使用一端带接头的半随机引物扩增重亚硫酸盐处理后的单链DNA，得到同时具有所述接头和所述单链DNA互补链的中间体DNA；所述半随机引物的序列为HHHHHHHH和HHHHGHHH，且H=ACT；其中所述接头具有由衔接物连接在一起的两段测序接头序列，且所述衔接物具有AP位点；所述单链DNA由基因组DNA及外源DNA片段化得到，所述外源DNA为没有甲基化修饰的λDNA，所述基因组DNA为哺乳动物DNA；b用单链DNA环化连接酶将所述中间体DNA的两端连接得到环化DNA；以及c使用APE酶切割所述环化DNA中的AP位点以去环化；步骤c后还包括，在酶切后的DNA的至少一段添加标签序列。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 广州金域医学检验集团股份有限公司 甲基化测序DNA文库的构建方法及其应用

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