申请/专利权人：佛山市第一人民医院

申请日：2023-12-22

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN117737243A

主分类号：C12Q1/6886

分类号：C12Q1/6886;C12N15/70;C12N15/65;C12N15/64;C12N15/11

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.09#实质审查的生效;2024.03.22#公开

摘要：本申请提出了一种提高突变基因检测灵敏度的方法及其应用，涉及突变基因检测技术领域。该方法包括以下步骤：采集样本，提取DNA；选用末端添加碱基A的Taq酶扩增DNA序列，得到扩增后的PCR产物；构建细菌质粒，该质粒中含有CRISPR和氨苄抗生素基因表达框，细菌质粒含有两个相邻的XcmI酶切位点，通过XcmI酶切制备T载体；利用快速连接酶将扩增后的PCR产物克隆到上述细菌质粒中得到连接产物；将连接产物转染到细菌感受态细胞中，经过孵育得到菌液，随后将菌液涂布在含有氨苄抗生素的培养基中培养得到耐药菌落；挑取耐药菌落进行基因序列验证。本申请提供的方法灵敏性高，还能够应用到肿瘤突变基因检测。

主权项：1.一种提高突变基因检测灵敏度的方法，其特征在于，其包括以下步骤：S1、采集样本，提取DNA；S2、选用末端添加碱基A的Taq酶扩增DNA序列，得到扩增后的PCR产物；S3、构建细菌质粒，该质粒中含有Cas9蛋白、CRISPRsgRNA序列和氨苄抗生素基因表达框，所述细菌质粒含有两个相邻的XcmI酶切位点，通过XcmI酶切制备T载体；S4、利用快速连接酶将S2中扩增后的PCR产物克隆到所述细菌质粒中得到连接产物；S5、将连接产物转染到细菌感受态细胞中，经过孵育得到菌液，随后将菌液涂布在含有氨苄抗生素的培养基中培养得到耐药菌落；S6、挑取耐药菌落进行一代基因序列验证。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 佛山市第一人民医院 一种提高突变基因检测灵敏度的方法及其应用

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