申请/专利权人：兰州大学

申请日：2023-12-25

公开（公告）日：2024-04-05

公开（公告）号：CN117820443A

主分类号：C07K14/015

分类号：C07K14/015;C12N15/35;C12N15/62;C12N15/70;C12P21/02;A61K39/12;A61P31/20

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.23#实质审查的生效;2024.04.05#公开

摘要：本发明公开了一种犬细小病毒亚单位疫苗的制备方法，具体涉及一种大肠杆菌菌株RosettaDE3制备犬细小病毒VP2结构蛋白的方法。本发明选择大肠杆菌RosettaDE3为宿主，采用融合促溶标签的策略将犬细小病毒VP2结构蛋白的基因导入表达载体中，获得的犬细小病毒VP2结构蛋白融合蛋白杂带较少、表达产量高，本发明还提供了一种新的亲和层析+自组装+分子筛三步纯化策略制备高纯度的CPV2cVP2结构蛋白病毒样颗粒，该病毒样颗粒能够被用于制备犬细小病毒亚单位疫苗。本发明的构建策略和纯化方法能够显著降低犬细小病毒疫苗生产成本，对犬细小病毒亚单位疫苗的研究和生产具有重要意义。

主权项：1.一种犬细小病毒VP2结构蛋白的病毒样颗粒制备方法，包括以下步骤：S1设计编码犬细小病毒VP2结构蛋白的基因序列，所述编码VP2结构蛋白的核苷酸序列如SEQIDNO：3所示；VP2结构蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示；S2合成编码His-SUMO-VP2融合蛋白的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列如SEQIDNO：4所示；S3将S2所述的His-SUMO-VP2融合蛋白基因序列通过Infusion重组技术克隆入原核表达载体pET28a，获得含编码His-SUMO-VP2融合蛋白的核苷酸序列的重组表达载体；S4将S3所述的重组表达载体转化至感受态大肠杆菌RosettaDE3菌株中，获得用于生产犬细小病毒VP2结构蛋白的重组大肠杆菌RosettaDE3菌株；S5以S4所述的重组菌株为种子菌株在优化培养基条件下进行His-SUMO-VP2融合蛋白的诱导表达，获得发酵液；S6离心S5所述的发酵液，获得重组菌菌体，破碎菌体，取上清，备用；S7取S6上清液进行亲和层析纯化，洗脱获得包含His-SUMO-VP2蛋白的组分；S8对包含His-SUMO-VP2蛋白的组分进行SUMO蛋白酶酶切处理，获得酶切处理液，酶切处理液包括VP2蛋白片段和His-SUMO蛋白片段；S9将步骤S8所述的酶切处理液进行孵育处理，使VP2蛋白自组装，形成自组装的VP2蛋白病毒样颗粒；S10对步骤S9所述的孵育液进行分子筛纯化，最终获得犬细小病毒VP2蛋白病毒样颗粒。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 兰州大学 一种犬细小病毒亚单位疫苗的制备方法

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