申请/专利权人：天津合生领航生物科技有限公司

申请日：2024-01-18

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN117586937B

主分类号：C12N1/21

分类号：C12N1/21;A23L33/21;C12N15/56;C12N15/54;C12P19/26;A61P37/02;A61P1/00;A61P31/12;A61P3/02;C12R1/19

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.12#授权;2024.03.12#实质审查的生效;2024.02.23#公开

摘要：本发明涉及一种提高乳酰‑N‑四糖产量的重组大肠杆菌构建及应用，通过将外源基因NsplgtA、Pbr3GalT及乳酰‑N‑四糖合成途径中的galE整合到宿主大肠杆菌基因组中，并敲除lacZ的表达，构建乳酰‑N‑四糖的完整合成途径，从而达到无需外源质粒及抗生素的添加实现高产乳酰‑N‑四糖的目的。构建得到的重组大肠杆菌能够高效生产乳酰‑N‑四糖，在5L发酵罐中，产量达到48.3gL，具有良好的工业化应用前景。

主权项：1.一种提高乳酰-N-四糖产量的重组大肠杆菌，其特征在于：以大肠杆菌BL21（DE3）为底盘宿主，敲除编码β半乳糖苷酶基因lacZ；敲除编码乙酸激酶基因ackA、敲除编码磷酸乙酰转移酶的基因pta、敲除编码乙醛辅酶A脱氢酶和铁依赖性的醇脱氢酶基因adhE、敲除编码酰基辅酶A硫酯酶基因yciA，并在以上位点分别整合β-1，3-乙酰葡萄糖胺转移酶基因NsplgtA；敲除编码蛋白S硝化酶的基因hcp、敲除编码抗原多糖共聚酶的基因wzzE、敲除编码O抗原共聚酶的基因wzzB、敲除编码N-乙酰葡糖氨-6-磷酸脱乙酰酶的基因nagA、并在以上位点分别整合β-1，3-半乳糖基转移酶基因Pbr3GalT；敲除编码O抗原连接酶的基因waaL，并在该处整合尿苷二磷酸葡萄糖4-差向异构酶基因galE；构建得到提高乳酰-N-四糖产量的重组大肠杆菌；其中，编码β-1，3-乙酰葡萄糖胺转移酶NsplgtA经过密码子优化的核苷酸序列如SQEIDNO.1所示；编码所述β-1,3-半乳糖基转移酶基因Pbr3GalT经过密码子优化的核苷酸序列如SQEIDNO.2所示；编码尿苷二磷酸葡萄糖4-差向异构酶galE经过密码子优化的核苷酸序列如SQEIDNO.3所示。

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权利要求：

百度查询： 天津合生领航生物科技有限公司 一种提高乳酰-N-四糖产量的重组大肠杆菌构建及应用

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