申请/专利权人：江苏集萃未来食品技术研究所有限公司;江南大学

申请日：2022-12-06

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN116004593B

主分类号：C12N9/78

分类号：C12N9/78;C12N15/55;C12N15/70;C12N1/21;C12P7/40;C12R1/19

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.12#授权;2024.03.26#著录事项变更;2023.05.12#实质审查的生效;2023.04.25#公开

摘要：本发明公开了一种半理性设计酶定向进化方法及其在腈水解酶分子改造中的应用，本发明应用ALF‑扫描对腈水解酶的活性口袋进行了几何重塑，以改变底物偏好性并提高催化效率。通过利用该方法结合定点饱和突变，成功获得了4个具有强芳香腈底物偏好性和高催化活性的突变体，分别为W170G，V198L，M197F和F202M。为了探究这4个突变的协同关系，又围绕这4个突变体构建了6个双组合突变体以及4个三组合突变体。通过组合突变，获得了协同增强突变体V198LW170G，该突变体对芳香腈具有显著的底物偏好性，并且具有更好的催化效率。与野生型相比，其对4种芳香腈底物的比酶活分别提高了11.10、12.10、26.25和2.55倍。

主权项：1.一种腈水解酶突变体，其特征在于，所述突变体是对氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的腈水解酶亲本的170、198、202位残基中的一种或多种进行突变，所述突变选自以下任一种：将第198位缬氨酸突变为亮氨酸；将第202位苯丙氨酸突变为甲硫氨酸；将第198位缬氨酸突变为亮氨酸，并将第170位色氨酸突变为甘氨酸。

全文数据：

权利要求：

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