申请/专利权人：青岛华大智造科技有限责任公司

申请日：2019-08-20

公开（公告）日：2024-04-16

公开（公告）号：CN114286867B

主分类号：C12Q1/6869

分类号：C12Q1/6869;C07H19/073

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.16#授权;2023.10.17#专利申请权的转移;2022.04.22#实质审查的生效;2022.04.05#公开

摘要：提供一种基于发光标记物光信号动力学及二次发光信号对多核苷酸进行测序的方法，其中利用不同的发光形式和发光时机来分辨不同核苷酸的依次掺入，从而实现多核苷酸序列的测定。

主权项：1.一种对核酸分子进行测序的方法，其包括以下步骤：1提供连接于支持物上的待测序的核酸分子，或者将待测序的核酸分子连接于支持物上；2添加用于起始核苷酸聚合反应的引物，用于进行核苷酸聚合反应的聚合酶，以及四种核苷酸，从而形成含有溶液相和固相的反应体系；其中，所述四种核苷酸分别为核苷酸A、TU、C和G的衍生物，并且具有碱基互补配对能力；并且，所述四种核苷酸的核糖或脱氧核糖的3'位置处的羟基被保护基团保护；并且，第一核苷酸通过可裂解的第二连接基团连接有第一分子标记，第二核苷酸通过可裂解的第一连接基团连接有第一分子标记，第三核苷酸通过可裂解的第三连接基团连接有第二分子标记，第四核苷酸没有连接分子标记；3使引物退火至待测序的核酸分子上，所述引物作为起始的生长的核酸链，与所述待测序的核酸分子一起形成连接于支持物上的双链体；4在允许聚合酶进行核苷酸聚合反应的条件下，使用聚合酶进行核苷酸聚合反应，从而将所述四种核苷酸中的一种并入生长的核酸链的3'端；5使上一步骤中的双链体与两种不同的荧光素酶接触并进行结合反应，所述两种荧光素酶分别能够特异性结合所述第一分子标记和第二分子标记，然后使所述荧光素酶在底物存在的情况下发生荧光反应，检测发出的荧光信号；6加入裂解液裂解第二连接基团，然后再次使所述荧光素酶在底物存在的情况下发生荧光反应，检测发出的荧光信号；7去除各个核苷酸的分子标记；8任选地重复步骤3-7一次或多次，从而获得所述核酸分子的序列信息；其中，所述第一连接基团与第三连接基团相同或不同，第二连接基团与第三连接基团不同。

全文数据：

权利要求：

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