申请/专利权人：江西九华药业有限公司

申请日：2019-07-24

公开（公告）日：2019-10-29

公开（公告）号：CN110389128A

主分类号：G01N21/84(20060101)

分类号：G01N21/84(20060101);G01N30/90(20060101);G01N30/06(20060101)

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的驳回

法律状态：2022.12.09#发明专利申请公布后的驳回;2019.11.22#实质审查的生效;2019.10.29#公开

摘要：本发明涉及中药制剂的质量检测方法，特别涉及腰疼丸的质量检测方法。本发明所述的检测方法，包括鉴别方法和含量测定方法，其中鉴别方法包括显微镜观察法和薄层色谱法，显微镜观察法，该方法包括对处方中山药、盐补骨脂、续断和南藤显微特征的鉴定，鉴别方法如下：取腰疼丸，置显微镜下观察：淀粉粒三角状卵形或矩圆形，脐点短缝状或人字状，为山药；种皮栅状细胞淡棕色或红棕色，表面观类多角形，壁稍厚，胞腔含红棕色物，为盐补骨脂；草酸钙簇晶直径药45μm，存在于淡棕黄色皱缩的薄壁细胞中，常数个排列成行，为续断；石细胞淡黄色，类卵性、类方形或长方形，壁较厚，纹孔细密，空腔较大，为南藤。

主权项：1.一种中药制剂腰疼丸的检测方法，其特征在于，包括鉴别方法和含量测定方法，其中鉴别方法包括显微镜观察法和薄层色谱法，显微镜观察法，该方法包括对处方中山药、盐补骨脂、续断和南藤显微特征的鉴定，鉴别方法如下：取腰疼丸，置显微镜下观察：淀粉粒三角状卵形或矩圆形，直径24～40μm，脐点短缝状或人字状，为山药；种皮栅状细胞淡棕色或红棕色，表面观类多角形，壁稍厚，胞腔含红棕色物，为盐补骨脂；草酸钙簇晶直径药45μm，存在于淡棕黄色皱缩的薄壁细胞中，常数个排列成行，为续断；石细胞淡黄色，类卵性、类方形或长方形，直径约至60μm，壁较厚，纹孔细密，空腔较大，为南藤。

全文数据：一种中药制剂腰疼丸的检测方法技术领域本发明涉及中药制剂的质量检测方法，特别涉及腰疼丸的质量检测方法。背景技术腰痛常见于肾脏疾病、风湿病、腰肌劳损及外伤等多种疾病，中医认为多由于感受寒湿、感受湿热、气滞血瘀、肾亏体虚造成，所以中成药治疗腰痛，必须根据病因不同，辨证选用。腰疼丸由南藤、补骨脂、续断、吉祥草、牛膝、山药组成，方中南藤温通袪风，消肿止痛强腰膝，补肾壮阳，止咳平喘，活血止痛；补骨脂助阳行气；吉祥草理血解毒、袪风接骨；续断与牛膝补肝肾，强筋骨，逐瘀通经；山药补脾养胃、生津益肺、，补肾涩精；诸药配伍，共凑补肾强腰，行气活血，散瘀止痛之效。主要用于治疗跌打损伤与腰肌劳损等所致的气滞血瘀证之腰痛。现有腰疼丸质量标准对补骨脂素、异补骨脂素、川续断皂苷Ⅵ、齐墩果酸进行了定性鉴别，而且有补骨脂素、异补骨脂素含量测定，但现有检测方法操作复杂，精度不高，实际操作过程中容易出现差错，产品质量控制专属性的可控性存在缺陷，难以准确测定腰疼主要成份。本发明经过研究，增加了成品制剂的显微鉴别项，分别对处方中山药、盐补骨脂、续断和南藤进行了显微特征的鉴别，确保制剂中含有功能主治的主要成分，发挥疗效。还提出了对有关物质进行准确的鉴别方法和准确的含量测定方法，该方法可以准确测定腰疼丸的质量，专属可控、稳定、简便、可行。发明内容本发明的目的在于提供一种中药制剂腰疼丸的检测方法本发明所述的腰疼丸，其配方组成和制备方法如下：制法：以上六味，粉碎成细粉，过筛，混匀。每100g粉末加炼蜜140～150g制成小蜜丸，即得。本发明所述的质量检测方法，包括鉴别方法和含量测定方法。本发明的方法共有4项，可以使用其中任何一项作为腰疼丸的测定方法，也可以组合使用作为对腰疼丸的测定方法，优选的是组合使用。本发明所述的检测方法，包括鉴别方法和含量测定方法，其中鉴别方法包括显微镜观察法和薄层色谱法，显微镜观察法，该方法包括对处方中山药、盐补骨脂、续断和南藤显微特征的鉴定，鉴别方法如下：取腰疼丸，置显微镜下观察：淀粉粒三角状卵形或矩圆形，直径24～40μm，脐点短缝状或人字状，为山药；种皮栅状细胞淡棕色或红棕色，表面观类多角形，壁稍厚，胞腔含红棕色物，为盐补骨脂；草酸钙簇晶直径药45μm，存在于淡棕黄色皱缩的薄壁细胞中，常数个排列成行，为续断；石细胞淡黄色，类卵性、类方形或长方形，直径约至60μm，壁较厚，纹孔细密，空腔较大，为南藤。薄层色谱法，该方法包括对补骨脂素、异补骨脂素、川续断皂苷、齐墩果酸的鉴别，鉴别方法如下：1取腰疼丸，加乙酸乙酯，加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯使溶解，作为供试品溶液；另取补骨脂对照药材，加乙酸乙酯，同法制成对照材料溶液；再取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品，加乙酸乙酯制成混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正已烷－乙酸乙酯为展开剂，取出，晾干，喷以氢氧化钾醇溶液，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同着色的荧光斑点；2取腰疼丸，加甲醇，加热回流，滤过，滤液蒸至近干，加水微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤，正丁醇液蒸干，残渣加水微热使溶解，加在聚酰胺柱上，用乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；取川续断皂苷Ⅵ对照品，加甲醇制成溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－水为展开剂，展开，取出，晾干上，喷以硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，在曝光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；3取腰疼丸，加盐酸乙醇溶液，加热回流，滤过，溶液浓缩至近干，加水加热使溶解，静置，取上清液，用三氯甲烷振摇提取，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加中性氧化铝，拌匀，干燥，装入层析柱中，依次用水、甲醇洗脱，弃去洗脱液，再用三氯甲烷-甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取牛膝对照药材，加盐酸乙醇溶液，同法制成对照药材溶液；再取齐墩果酸对照品，加甲醇制成溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液，对照药材及对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环已烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，在日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点。优选的，采用薄层色谱法进行鉴别，方法如下：1取腰疼丸3g，剪碎，加乙酸乙酯30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；另取补骨脂对照药材0.3g，加乙酸乙酯10ml，同法制成对照材料溶液；再取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml各含0.2mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正已烷－乙酸乙酯15：4为展开剂，展开2次，取出，晾干，喷以10％氢氧化钾醇溶液，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同着色的荧光斑点；2取腰疼丸6g，剪碎，加甲醇40ml，虽热回流30分钟，滤过，滤液蒸至近干，加水25ml微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用氨试液60ml洗涤，正丁醇液蒸干，残渣加水15ml微热使溶解，加在聚酰胺柱60-100目，3g内径2cm，用水预洗，上，用80％乙醇60ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，作为供试品溶液；取川续断皂苷Ⅵ对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－水13：7：210℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干上，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在曝光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；3取本品18g，剪碎，加盐酸乙醇溶液1→1080ml，加热回流1小时，滤过，溶液浓缩至近干，加水40ml加热使溶解，静置，取上清液，用三氯甲烷振摇提取3次，每次30ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加中性氧化铝100-200目3g，拌匀，干燥，装入层析柱内径为0.9cm中，依次用水、20％甲醇各30ml洗脱，弃去洗脱液，再用三氯甲烷-甲醇20：140ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取牛膝对照药材0.5g，加盐酸乙醇溶液1→1040ml，同法制成对照药材溶液；再取齐墩果酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10～20μl，对照药材及对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环已烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸20：5：8：0.1为展开剂，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点。本发明所述的含量测定方法，是对腰疼丸中的有效成份进行含量测定。其中所述的有效成份为以补骨脂素C11H6O3和异补骨脂素C11H6O3的总量计。本发明的含量测定方法采用高效液相分析法。本发明所述的含量测定方法，包括以下步骤：1对照品溶液的制备：取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，精密称定，加甲醇制成混合溶液，即得；2供试品溶液的制备：取小蜜丸或取重量差异项下的大蜜丸，剪碎，混匀，置具塞锥形瓶中，加入甲醇，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；3测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；色谱条件：采用C18色谱柱,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水为流动相。优选的，本发明所述的含量测定方法，包括以下步骤：1对照品溶液的制备：取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含10μl的混合溶液，即得；2供试品溶液的制备：取小蜜丸或取重量差异项下的大蜜丸，剪碎，混匀，取约0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理功率500W，频率40kHz1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；3测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；色谱条件：采用DIKMA，C18色谱柱,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水30：70为流动相；本发明为等度洗脱，流速为1.0mlmin,柱温：25℃，检测波长为246nm，理论板数按补骨脂素峰计算应不低于3000。对照品溶液测定数据表供试品溶液测定数据表计算公式：含量平均值＝2.76mgg相对偏差％＝1.3％控制项：本品含盐补骨脂素以补骨脂素C11H6O3和异补骨脂素C11H6O3的总量计，大蜜丸每丸不得少于10.26mg；小蜜丸每1g不得少于1.14mg。本发明的有益效果：本发明建立的液相色谱测定腰疼丸中有效成分的含量的方法，符合方法学验证的要求，并操作简便，灵敏度高，测定准确，适用性强，能够用于对该产品的质量控制。同时，填补了该产品定量控制的空白，使得对该产品能够进行更有效的质量分析，更全面反映产品的质量状况，保证该产品的质量稳定性。同时，本发明通过薄层鉴别法对腰疼丸中药材进行鉴别，提高药品的质量和安全性。具体实施方式以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。实施例1腰疼丸中山药、盐补骨脂、续断、南藤山蒟的鉴别1取腰疼丸，置显微镜下观察：淀粉粒三角状卵形或矩圆形，直径24～40μm，脐点短缝状或人字状山药。种皮栅状细胞淡棕色或红棕色，表面观类多角形，壁稍厚，胞腔含红棕色物盐补骨脂。草酸钙簇晶直径药45μm，存在于淡棕黄色皱缩的薄壁细胞中，常数个排列成行续断。石细胞淡黄色，类卵性、类方形或长方形，直径约至60μm，壁较厚，纹孔细密，空腔较大南藤山蒟2取腰疼丸3g，剪碎，加乙酸乙酯30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液。另取补骨脂对照药材0.3g，加乙酸乙酯10ml，同法制成对照材料溶液。再取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml各含0.2mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正已烷－乙酸乙酯15：4为展开剂，展开2次，取出，晾干，喷以10％氢氧化钾醇溶液，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同着色的荧光斑点。3取腰疼丸6g，剪碎，加甲醇40ml，虽热回流30分钟，滤过，滤液蒸至近干，加水25ml微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用氨试液60ml洗涤，正丁醇液蒸干，残渣加水15ml微热使溶解，加在聚酰胺柱60-100目，3g内径2cm，用水预洗，上，用80％乙醇60ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，作为供试品溶液。取川续断皂苷Ⅵ对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－水13：7：210℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干上，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在曝光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。4取本品18g，剪碎，加盐酸乙醇溶液1→1080ml，加热回流1小时，滤过，溶液浓缩至近干，加水40ml加热使溶解，静置，取上清液，用三氯甲烷振摇提取3次，每次30ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加中性氧化铝100-200目3g，拌匀，干燥，装入层析柱内径为0.9cm中，依次用水、20％甲醇各30ml洗脱，弃去洗脱液，再用三氯甲烷-甲醇20：140ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取牛膝对照药材0.5g，加盐酸乙醇溶液1→1040ml，同法制成对照药材溶液。再取齐墩果酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10～20μl，对照药材及对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环已烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸20：5：8：0.1为展开剂，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点。实施例2腰疼丸中补骨脂素和异补骨脂素的含量测定色谱条件：采用DIKMA，C18色谱柱,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水30：70为流动相；流速为1.0mlmin,检测波长为246nm。理论板数按补骨脂素峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备：取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含10μl的混合溶液，即得。供试品溶液的制备：取小蜜丸或取重量差异项下的大蜜丸，剪碎，混匀，取约0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理功率500W，频率40kHz1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品含盐补骨脂以补骨脂素和异补骨脂素的总量计，大蜜丸每丸不少于10.26mg，小蜜丸每1g不少于1.14mg。试验例1、本发明含量测定方法的筛选过程1.提取条件的选择:根据补骨脂素、异补骨脂素溶于甲醇、乙醇、苯、氯仿、丙酮的性质，实验选用超声提取。分别用甲醇超声0.5小时、1小时、1、5小时、2小时，结果表明超声时间为1小时的效果比较好。在实验中，分别以甲醇、水、乙醚为溶剂，超声处理1小时，结果表明以甲醇处理样品测定效果最佳，且甲醇提取的杂质少，可以更好保护色谱柱，因此本方法采用甲醇作为提取溶剂。表1超声时间的选择表2提取溶剂的选择2.色谱条件考察2.1流动相的选择：实验先用乙腈和水的四种不同比的流动相进行考察，其比例分别为：20：55、25：60、30：70、35：75，结果表明，四种不同配比的流动相中，乙腈：水30：70分离效果最好，样品分离度符合规定。2.2色谱条件及系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水30：70为流动相；流速为1.0mlmin；柱温：25℃，检测波长为246nm。理论板数按补骨脂素峰计算应不低于3000.补骨脂素C11H6O3和异补骨脂素C11H6O3对照品中检院、成都普菲德提供，供含量测定用；乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。2.3对照品溶液的制备：取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含10μl的混合溶液，即得。2.4供试品溶液的制备：取小蜜丸或取重量差异项下的大蜜丸，剪碎，混匀，取约0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理功率500W，频率40kHz1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。3、线性关系考察表,表34、精密度试验精密吸取补骨脂素、异补骨脂素对照品溶液，连续进样5次，测定峰面积，结果表4：5、稳定性试验取样品，按[含量测定]项目下补骨脂素、异补骨脂素的方法制备供试品溶液，分别于配置后第0、2、4、6、8小时依法进行测定，结果见表5.表5稳定性试验考察表6.重现性试验分别取同一样品，精密稳定5份，按高效液相色谱法连续进样5次，结果表明本法重现性良好，结果见表67.加样回收试验：精密称取已经知识含量的样品五份，分别加入一定量的补骨脂素、异补骨脂素对照品，按[含量测定]项下的补骨脂素、异补骨脂素的方法测定，结果见表7：表7、加样回收试验结果补骨脂素平均回收率为97.26％，RSD：1.3％，异补骨脂素平均回收率为95.75％，RSD：0.9％，加样回收率试验结果表明本法回收率良好。8.十批样品的含量测定：按[含量测定]项下补骨脂素、异补骨脂素的方法对十批样品进行了含量测定，结果见表8：表8、十批样品的含量测定结果根据上述测定结果，本发明所述优选的本品含盐补骨脂以补骨脂素和异补骨脂素的总量计，大蜜丸每丸不少于10.26mg，小蜜丸每1g不少于1.14mg。

权利要求：1.一种中药制剂腰疼丸的检测方法，其特征在于，包括鉴别方法和含量测定方法，其中鉴别方法包括显微镜观察法和薄层色谱法，显微镜观察法，该方法包括对处方中山药、盐补骨脂、续断和南藤显微特征的鉴定，鉴别方法如下：取腰疼丸，置显微镜下观察：淀粉粒三角状卵形或矩圆形，直径24～40μm，脐点短缝状或人字状，为山药；种皮栅状细胞淡棕色或红棕色，表面观类多角形，壁稍厚，胞腔含红棕色物，为盐补骨脂；草酸钙簇晶直径药45μm，存在于淡棕黄色皱缩的薄壁细胞中，常数个排列成行，为续断；石细胞淡黄色，类卵性、类方形或长方形，直径约至60μm，壁较厚，纹孔细密，空腔较大，为南藤。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，薄层色谱法，该方法包括对补骨脂素、异补骨脂素、川续断皂苷、齐墩果酸的鉴别，鉴别方法如下：1取腰疼丸，加乙酸乙酯，加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯使溶解，作为供试品溶液；另取补骨脂对照药材，加乙酸乙酯，同法制成对照材料溶液；再取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品，加乙酸乙酯制成混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正已烷－乙酸乙酯为展开剂，取出，晾干，喷以氢氧化钾醇溶液，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同着色的荧光斑点；2取腰疼丸，加甲醇，加热回流，滤过，滤液蒸至近干，加水微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤，正丁醇液蒸干，残渣加水微热使溶解，加在聚酰胺柱上，用乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；取川续断皂苷Ⅵ对照品，加甲醇制成溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－水为展开剂，展开，取出，晾干上，喷以硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，在曝光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；3取腰疼丸，加盐酸乙醇溶液，加热回流，滤过，溶液浓缩至近干，加水加热使溶解，静置，取上清液，用三氯甲烷振摇提取，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加中性氧化铝，拌匀，干燥，装入层析柱中，依次用水、甲醇洗脱，弃去洗脱液，再用三氯甲烷-甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；另取牛膝对照药材，加盐酸乙醇溶液，同法制成对照药材溶液；再取齐墩果酸对照品，加甲醇制成溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液，对照药材及对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环已烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，在日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，薄层色谱法，该方法包括对补骨脂素、异补骨脂素、川续断皂苷、齐墩果酸的鉴别，鉴别方法如下：1取腰疼丸3g，剪碎，加乙酸乙酯30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；另取补骨脂对照药材0.3g，加乙酸乙酯10ml，同法制成对照材料溶液；再取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品，加乙酸乙酯制成每1ml各含0.2mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正已烷－乙酸乙酯15：4为展开剂，展开2次，取出，晾干，喷以10％氢氧化钾醇溶液，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同着色的荧光斑点；2取腰疼丸6g，剪碎，加甲醇40ml，虽热回流30分钟，滤过，滤液蒸至近干，加水25ml微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用氨试液60ml洗涤，正丁醇液蒸干，残渣加水15ml微热使溶解，加在聚酰胺柱60-100目，3g内径2cm，用水预洗，上，用80％乙醇60ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，作为供试品溶液；取川续断皂苷Ⅵ对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－水13：7：210℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干上，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在曝光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；3取本品18g，剪碎，加盐酸乙醇溶液1→1080ml，加热回流1小时，滤过，溶液浓缩至近干，加水40ml加热使溶解，静置，取上清液，用三氯甲烷振摇提取3次，每次30ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，加中性氧化铝100-200目3g，拌匀，干燥，装入层析柱内径为0.9cm中，依次用水、20％甲醇各30ml洗脱，弃去洗脱液，再用三氯甲烷-甲醇20：140ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取牛膝对照药材0.5g，加盐酸乙醇溶液1→1040ml，同法制成对照药材溶液；再取齐墩果酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10～20μl，对照药材及对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环已烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸20：5：8：0.1为展开剂，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，含量测定方法，用高效液相色谱法测定补骨脂素C11H6O3和异补骨脂素C11H6O3。5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，含量测定方法，包括以下步骤：1对照品溶液的制备：取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，精密称定，加甲醇制成混合溶液，即得；2供试品溶液的制备：取小蜜丸或取重量差异项下的大蜜丸，剪碎，混匀，置具塞锥形瓶中，加入甲醇，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；3测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；色谱条件：采用C18色谱柱,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水为流动相。6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，含量测定方法，包括以下步骤：1对照品溶液的制备：取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含10μl的混合溶液，即得；2供试品溶液的制备：取小蜜丸或取重量差异项下的大蜜丸，剪碎，混匀，取约0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理功率500W，频率40kHz1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；3测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；色谱条件：采用DIKMA，C18色谱柱,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水30：70为流动相；等度洗脱，流速为1.0mlmin,柱温：25℃，检测波长为246nm，理论板数按补骨脂素峰计算应不低于3000。

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