申请/专利权人：南京师范大学

申请日：2017-01-11

公开（公告）日：2020-07-31

公开（公告）号：CN107043733B

主分类号：C12N1/38(20060101)

分类号：C12N1/38(20060101);C12N1/12(20060101);C12R1/89(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2020.07.31#授权;2017.09.08#实质审查的生效;2017.08.15#公开

摘要：本发明公开了甜菊糖在促进小球藻生长中的应用，相对于现有技术，本发明提供了甜菊糖或甜叶菊浸提液在促进小球藻生长和提高培养效率的应用。一定条件下，适量甜菊糖或甜叶菊浸提液的添加可以显著提高小球藻的生长速度，增加培养液中小球藻的数量，从而提高小球藻的培养效率和产量，适于进一步推广应用。

主权项：1.甜菊糖在促进小球藻生长中的应用，其特征在于，应用方法如下：在小球藻培养液中添加甜菊糖，其添加量为0.2-10mM；或者，所述甜菊糖的存在形式为甜叶菊浸提液，其中含有甜菊糖，应用方法如下：在小球藻培养液中添加甜叶菊浸提液，其添加量为2％-10％以重量计，ww。

全文数据：甜菊糖在促进小球藻生长中的应用技术领域[0001]本发明公开了甜菊糖或甜叶菊浸提液在促进小球藻生长中的应用，属于甜菊糖新应用领域。背景技术[0002]小球藻属绿藻门（Chlorophyta绿藻纲（Chlorophyceae绿球藻目Chlorococcales卵囊藻科Oocystaceae小球藻属Chlorolla的普生性单细胞藻类曹云涛，孔莹宝，葸玉琴，李龙囡，夏春谷.不同营养方式对普通小球藻生长特性和细胞组成的影响[_1].食品与发酵工业，2011，3710，45-51。含有丰富的蛋白质、脂质、多糖、食用纤维、维生素、微量元素和活性代谢产物，其多糖及糖蛋白具有抗肿瘤、抗病原菌、抗病毒感染及增强免疫力等活性，正成为近些年来的研宄热点（孔维宝，李龙囡，张继，夏春谷.小球藻的营养保健功能及其在食品工业中的应用[J].食品科学,2010,319,323-328。目前小球藻己广泛应用于食品添加剂、动物饲料、美容以及医药保健等领域，美国和日本将其作为优良食品和动物饲料添加剂有30多年的历史（李师翁，李虎乾.植物单细胞蛋白资源:小球藻开发利用研宄的现状[J].生物技术,1997,7⑶：45-48。[0003]目前，微藻生物技术发展很快，小球藻异养技术为微藻繁殖提供了一条新的途径，微藻作为新的功能食品具有重要的意义胡月薇,史贤明.新食品资源小球藻的生理活性与保健功能[J]。中国食品学报，2002，22:69-72。目前，小球藻粉已被我国农业部批准为新型饲料添加剂欧阳克氙，罗晓燕，刘建平，蔡力创，肖正强.小球藻的营养价值及其在饲料工业上的应用进展[J].江西科学，2013,315:590-595。[0004]目前，小球藻培养中，存在生长周期较长、生长较慢的问题，甜菊糖已在高倍甜味剂等方面应用，其功能有着众多的优势，现有技术中没有将甜菊糖或甜叶菊浸提液应用于小球藻培养的研究。发明内容[0005]发明目的：针对上述技术问题，本发明在实验的基础上提出了甜菊糖或甜叶菊浸提液在促进小球藻生长、提高培养效率等方面的应用。[0006]技术方案:将适量的甜菊糖或甜叶菊浸提液加到小球藻培养液中，促进小球藻的生长。所述甜菊糖中的主要成分可以为甜菊糖的各单组分，也可为甜菊苷SS、莱苞迪苷ARA和莱苞迪苷CRC等单组分任意比例混合物。[0007]优选，在小球藻培养液中添加甜菊糖，其添加量为0.01-10mM，更优选0.2-8mM。[0008]优选，在小球藻培养液中添加甜菊糖，其添加量为6mM。[0009]甜叶菊浸提液的制备方法:将甜叶菊以1:10-20wv的比例加入水中煮沸提取得甜叶菊浸提液。[0010]在小球藻培养液中添加甜叶菊浸提液，添加量为0.01%-10%ww，更优选2%-8%ww〇[0011]优选:在小球藻培养液中添加甜叶菊浸提液，添加量为5%ww〇[0012]甜叶菊（SteviarebaudianaBertoniHemsl为菊科多年生草本植物，原产美洲巴拉圭和巴西交界的阿曼山脉赵永平，何庆祥，朱亚等.不同基因型甜叶菊产量和甜菊糖苷含量研宄[J].中国农学通报，2010，2619，73-75。甜叶菊中甜味成分一甜菊糖作为新兴的天然甜味剂，具有低热、高甜、理化性质稳定、安全无副作用等优点，同时具有调节血糖、降脂、降压、抗癌、抗菌、抗病毒等生物活性，因而被誉为“最有发展前途的新糖源”（徐健，李维林•甜菊糖药理作用及产业工艺研宄进展[J]•食品与发酵工业，2013，3910，207-214〇[0013]本发明应用中，最重要的是甜菊糖或甜叶菊浸提液的添加以及用量的限定，其他培养条件对本发明的应用效果不会产生实质性的影响，如所用小球藻培养液可以为现有技术常用的小球藻培养液，培养温度、光照强度和培养时间等都可以根据培养目的进行调整。[0014]本发明的基础小球藻培养液配方可以是:碳酸钠:0.02gL，硝酸钠:2.OgL，磷酸二氢钾:0•02gL，硫酸镁:0•1gL，尿素:0•8gL，pH6•0•或其他合适的培养基。[0015]技术效果:相对于现有技术，本发明提供了甜菊糖或甜叶菊浸提液在促进小球藻生长中的应用，在天然培养池中应用甜菊糖及甜叶菊浸提液也能促进小球藻的生长，显著增加小球藻的数量，从而提高培养效率。附图说明[0016]图1不加甜菊糖时培养小球藻的增长率培养时间5天）；[0017]图2添加不同浓度甜菊糖时小球藻的增长率培养时间5天）；[0018]图3小球藻显微照片40x10,培养5天）；[0019]图4甜菊糖添加量6mM时小球藻显微照片40x10,培养时间5天）；[0020]图5甜菊糖添加量为lOmM的小球藻培养液HPLC分析；[0021]图6甜菊糖添加量为lOmM小球藻液培养液的HPLC分析培养时间5天）；[0022]图7添加5%甜叶菊浸提液初始培养液的HPLC分析添加量5%;[0023]图8添加5%甜叶菊浸提液时小球藻培养液的HPLC分析培养时间5天）。具体实施方式[0024]下面结合附图和具体实例，进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不是限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。[0025]以下所有实施例中，小球藻数量的测定均用血球计数板计数或在680nm条件下测吸光度计算。甜菊糖或甜叶菊购于江苏宝莲生物科技股份有限公司。所有培养液的配方均为:碳酸钠:0.02gL，硝酸钠:2_0gL，磷酸二氢钾:〇.〇2gL，硫酸镁:〇.lgL，尿素:〇.8gL，pH6.0〇[0026]附图1和2中增长率计算:小球藻的增长率=[增长后的量—增长前的量增长前的量]X100%.[0027]实施例1[0028]50mL的藻液培养液）中加入2mM0_09g甜菊糖，另一份对照不加甜菊糖），在25r，4000Lux光照下培养5天每天定时摇匀），用血球板计数法和光密度测定法检测小球藻的生长量，与空白对照相比，小球藻的数量增加了107%•[0029]实施例2[0030]50mL的藻液培养液）中加入4mM〇.14g甜菊糖，另一份对照（不加甜菊糖），在25°C，4000Lux光照强度的条件下培养5天每天定时摇匀），用血球板计数法和光密度测定法检测小球藻的生长量，与空白对照相比，小球藻数量增加了203%.[0031]实施例3[0032]50mL的藻液培养液）中加入6mM0•27g甜菊糖，另一份做对照（不加甜菊糖），在25。：，4000Lux光照强度的条件下培养5天每天定时摇匀），用血球板计数法和光密度测定法检测小球藻的生长量，与空白对照相比，小球藻的数量增加了368%•[0033]实施例4[0034]50mL的藻液培养液）中加入8mM0•3如甜菊糖，另一份做对照不加甜菊糖），在25。：，4000Lux光照强度的条件下培养5天每天定时摇匀），用血球板计数法和光密度测定法检测小球藻的生长量，与空白对照相比，小球藻的数量增加了313%•[0035]实施例5[0036]50mL的藻液培养液）中加入l〇mM0•45g甜菊糖粗品，另一份做对照（不加甜菊糖），在25°C，4000Lux光照强度的条件下培养5天每天定时摇匀），用血球板计数法和光密度测定法检测小球藻的生长量，与空白对照相比，小球藻的数量增加了284%•[0037]实施例6[0038]50mL的藻液培养液）中加入〇•〇•〇〇9g甜菊糖粗品，另一份做对照不加甜菊糖），在25r，4000Lux光照强度的条件下培养5天每天定时摇匀），用血球板计数法和光密度测定法检测小球藻的生长量，与空白对照相比，小球藻的数量增加了296%•[0039]实施例7[0040]甜叶菊以1:15wv的比例加入水中煮沸5min，将甜叶菊浸提液添加到小球藻的培养液中，添加量为5%ww;另一份不添加甜叶菊浸提液作对照，在25°C，4000Lux光照强度的条件下培养5天每天定时摇匀），用血球板计数法和光密度测定法检测小球藻的生长量，与对照相比，小球藻的数量增加了209%•[0041]实施例8[0042]甜叶菊以1:1〇wv的比例加入水中煮沸伽in，将甜叶菊浸提液添加到小球藻的培养液中，添加量为2%ww;另一份不添加甜叶菊浸提液作对照，在25°C，4000Lux光照强度的条件下培养5天每天定时摇匀），用血球板计数法和光密度测定法检测小球藻的生长量，与对照相比，小球藻的数量增加了172%.[0043]实施例9[0044]甜叶菊以1:20wv的比例加入水中煮沸4min，将甜叶菊浸提液添加到小球藻的培养液中，添加量为1〇%ww;另一份不添加甜叶菊浸提液作对照，在25°C，4000Lux光照强度的条件下培养5天每天定时摇匀），用血球板计数法和光密度测定法检测小球藻的生长量，与对照相比，小球藻的数量增加了195%•[0045]实施例10[0046]甜叶菊以1:12wv的比例加入水中煮沸5min，将甜叶菊浸提液添加到小球藻的培养液中，添加量为8%ww;另一份不添加甜叶菊浸提液作对照，在25°C，4000Lux光照强度的条件下培养5天每天定时摇匀），用血球板计数法和光密度测定法检测小球藻的生长量，与对照相比，小球藻的数量增加了187%•[0047]实施例11[0048]甜叶菊以1:18Ov的比例加入水中煮沸7min，将甜叶菊浸提液添加到小球藻的培养液中，添加量为ww;另一份不添加甜叶菊浸提液作对照，在25°C，4000Lux光照强度的条件下培养5天每天定时摇匀），用血球板计数法和光密度测定法检测小球藻的生长量，与对照相比，小球藻的数量增加了179%•[0049]结果分析：[0050]丨、附图1为小球藻在5天培养时间的增长率，附图2为添加不同浓度甜菊糖时小球藻的增长率培养时间为5天），由图2可见，适量添加甜菊糖可以显著提高培养小球藻的数量。[0051]2、图3为小球藻的显微照片40x10,培养5天）；图4为甜菊糖添加量6mM时小球藻的显微照片4〇xl〇,培养时间为5天）；由图3和图4的比较可见，与不加甜菊糖时的小球藻培养液相比，添加甜菊糖后的小球藻培养液中的藻体数量增多，说明一定条件下，添加适量的甜菊糖可以显著提高小球藻的数量。[0052]3、由图5和图6的比较可见，甜菊糖的添加量为10mM的小球藻培养液中甜菊糖中不同糖苷的量在同步减少，分析小球藻将甜菊糖中各糖苷作为养份来源之一。原料中甜菊糖苷成份甜菊苷SS的量为27.41mg，培养了5天后，甜菊苷SS的量降为18.61mg，在此时间段甜菊苷33的利用率为32.11%[利用率％=甜菊糖的减少量甜菊糖量\100%].[0053]4、由图7和图8比较可见，在小球藻培养基中添加适量的甜叶菊浸提液，经培养后其中甜菊苷的量也有一定程度的变化，说明与加入甜菊糖的情况相似，其中所含的甜菊糖苷也会为小球藻所利用。

权利要求：1.甜菊糖在促进小球藻生长中的应用。2.根据权利要求1所述的甜菊糖在促进小球藻生长中的应用，其特征在于，所述甜菊糖中的主要成分为甜菊苷SS、莱苞迪苷ARA和莱苞迪苷CRC。3.根据权利要求1所述的甜菊糖在促进小球藻生长中的应用，其特征在于，应用方法如下:在小球藻培养液中添加甜菊糖，其添加量为〇•〇l-l〇mM。4.根据权利要求1所述的甜菊糖在促进小球藻生长中的应用，其特征在于，应用方法如下:在小球藻培养液中添加甜菊糖，其添加量为6mM。5.根据权利要求1所述的甜菊糖在促进小球藻生长中的应用，其特征在于，所述甜菊糖的存在形式为甜叶菊浸提液，其中含有甜菊糖。6.根据权利要求5所述的甜菊糖在促进小球藻生长中的应用，其特征在于，所述甜叶菊浸提液的制备方法如下:将甜叶菊以1:10-2〇wv的比例加入水中煮沸4-8min，过滤，gp得所述甜叶菊浸提液。7.根据权利要求5所述的甜菊糖在促进小球藻生长中的应用，其特征在于，应用方法如下:在小球藻培养液中添加甜叶菊浸提液，其添加量为〇.〇1以重量计，ww。8.根据权利要求5所述的甜菊糖在促进小球藻生长中的应用，其特征在于，应用方法如下:在小球藻培养液中添加甜叶菊浸提液，添加量为5%ww。

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