申请/专利权人：南京市产品质量监督检验院(南京市质量发展与先进技术应用研究院);东南大学

申请日：2023-08-18

公开（公告）日：2023-09-19

公开（公告）号：CN116773809A

主分类号：G01N33/569

分类号：G01N33/569;G01N33/543;G01N33/532;G01N21/76

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.10.10#实质审查的生效;2023.09.19#公开

摘要：本发明公开了一种基于磁免疫‑化学发光检测光腥黑粉菌孢子的方法。本发明首次制备了小麦光腥黑粉菌的多克隆抗体，以小麦光腥黑粉菌孢子作为抗原免疫新西兰大白兔，取血后离心得血清，再经过亲和柱分离纯化，制得多克隆抗体，基于多克隆抗体建立了磁免疫化学发光的检测方法，可用于小麦、面粉、土壤等样本中光腥黑粉菌孢子的检测。该方法具有高灵敏度、高准确度、高通量等优势，在小麦收储过程中应用于小麦样品的检测，提高粮食在收购、流通环节的安全监管，根据定量分析数据对感染小麦进行分级管理。

主权项：1.一种基于磁免疫-化学发光检测光腥黑粉菌孢子的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，将生物素溶液与小麦光腥黑粉菌多克隆抗体反应，得到生物素标记多抗；步骤2，采用HRP偶联试剂盒制备HRP偶联小麦光腥黑粉菌多克隆抗体；步骤3，将链霉亲和素磁珠用PBST溶液清洗，然后加入生物素标记多抗，孵育后用PBST溶液清洗，磁分离后加入待测光腥黑粉菌孢子溶液，孵育后用PBST溶液清洗，磁分离后加入HRP偶联小麦光腥黑粉菌多克隆抗体，孵育后用PBST溶液清洗，然后加入化学发光试剂，用酶标仪检测化学发光强度，带入标准曲线后计算得到光腥黑粉菌孢子浓度；所述小麦光腥黑粉菌多克隆抗体的制备过程为：从感染小麦光腥黑穗病的阳性样品中挑选完整的染病籽粒，划开病瘿，释放出里面的黑色粉末，用0.5%次氯酸钠溶液进行杀菌处理，用无菌纯水清洗后离心得到孢子，取105个mL浓度的孢子溶液与弗氏完全佐剂等体积混合、乳化，以13周龄雄性新西兰大白兔作为免疫动物，每只兔的免疫体积为1mL，免疫后第2周和第6周进行加强免疫，最后一次免疫2周后颈动脉取血，对兔血清进行亲和纯化，得到小麦光腥黑粉菌孢子的多克隆抗体。

全文数据：

权利要求：

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