申请/专利权人：南通海关综合技术中心(江苏国际旅行卫生保健中心南通分中心、南通海关口岸门诊部)

申请日：2021-04-28

公开（公告）日：2024-02-20

公开（公告）号：CN113005230B

主分类号：C12Q1/70

分类号：C12Q1/70;C12Q1/6844;C12R1/93

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.02.20#授权;2021.07.09#实质审查的生效;2021.06.22#公开

摘要：本发明涉及一种亚洲型寨卡病毒RT‑RIACRISPR‑Cas12a检测试剂盒及其检测方法。所述的试剂盒包括用于亚洲型寨卡病毒RT‑RIACRISPR‑Cas12a检测的引物和探针序列，所述的引物和探针序列包括寨卡病毒ZIKV和内参基因β‑actin基因的RIA引物序列、Cas12a反应crRNA序列和荧光报告探针序列，crRNA序列5’端含有T7启动子识别位点，ZIKV和β‑actin基因荧光报告探针序列5’端标记的荧光基团为FAM、HEX、ROX、VIC、CY5中一种，ZIKV和β‑actin基因荧光报告探针序列3’端标记的淬灭基团为TAMRA、MGB、BHQ1和BHQ2中的一种；且探针ZIKV和β‑actin的5’端标记的荧光基团均不相同；所述的试剂盒还包括：RIA反应试剂组分；Cas12a反应试剂组分；样本释放剂；所述的RIA反应试剂组分包括RIABuffer、RIA酶和RIA激活剂；所述的Cas12a反应试剂组分包括CasBuffer和Cas12a酶。

主权项：1.一种亚洲型寨卡病毒RT-RPACRISPR-Cas12a检测试剂盒，包括用于亚洲型寨卡病毒RT-RPACRISPR-Cas12a检测的引物和探针序列，所述的引物和探针序列包括寨卡病毒ZIKV和内参基因β-actin基因的RPA引物序列、Cas12a反应crRNA序列和荧光报告探针序列，其特征在于：ZIKVRPA引物的核苷酸序列如下所示：引物ZIKV-F：5’-TTGAGGGAGAGTTCAAGCTTAGGACGGAGCAA-3’，SEQIDNO：1；引物ZIKV-R：5’-GAGATGCGACCTGATAGGCCAGCCAAACAGGA-3’，SEQIDNO：2；引物β-actin-F：5’-TGGATCAGCAAGCAGGAGTATGACGAGTCCGG-3’，SEQIDNO：3；引物β-actin-R：5’-CATCTTGTTTTCTGCGCAAGTTAGGTTTTGTC-3’，SEQIDNO：4；crRNA序列5’端含有T7启动子识别位点，核苷酸序列如下所示：ZIKV-crRNA：5’-TAATTTCTACTAAGTGTAGATgacctttgtggaactcatgaaaagaggagatctt-3’，SEQIDNO：5；β-actin-crRNA：5’-TAATTTCTACTAAGTGTAGATcggtggacgatggaggggccgg-3’，SEQIDNO：6；荧光报告探针核苷酸序列如下所示：ZIKV-P：5’-TTATT-3’，SEQIDNO：7；β-actin-P：5’-TTAATT-3’，SEQIDNO：8；ZIKV和β-actin基因荧光报告探针序列5’端标记的荧光基团为FAM、HEX、ROX、VIC、CY5中一种，ZIKV和β-actin基因荧光报告探针序列3’端标记的淬灭基团为TAMRA、MGB、BHQ1和BHQ2中的一种；且探针ZIKV和β-actin的5’端标记的荧光基团均不相同；所述的试剂盒还包括：1RPA反应试剂组分；2Cas12a反应试剂组分；3样本释放剂；所述的RPA反应试剂组分包括RPABuffer、RPA酶和RPA激活剂；所述的Cas12a反应试剂组分包括CasBuffer和Cas12a酶。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 南通海关综合技术中心(江苏国际旅行卫生保健中心南通分中心、南通海关口岸门诊部) 亚洲型寨卡病毒RT-RPA/CRISPR-Cas12a检测试剂盒及其检测方法

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