申请/专利权人：中国人民解放军空军军医大学;复旦大学附属中山医院

申请日：2022-11-07

公开（公告）日：2024-03-15

公开（公告）号：CN116396980B

主分类号：C12N15/85

分类号：C12N15/85;C07K14/175;A61K39/12;A61P31/14

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.15#授权;2024.02.27#专利申请权的转移;2023.07.25#实质审查的生效;2023.07.07#公开

摘要：本发明涉及疫苗制备方法领域，具体公开了基于汉滩和汉城病毒包膜糖蛋白保守区域设计的通用亚单位疫苗及其制备方法和应用，所述亚单位疫苗制备步骤为：分别提取汉滩病毒和汉城病毒M基因序列的共有序列，去除其中的滞留信号，分别表达不同长度的可溶性蛋白。通过在序列C段加HIS标签的方法，进行蛋白纯化，将合成好的基因克隆到表达载体中，转染S2细胞，筛选高表达株；然后批量成产，并通过蛋白携带的HIS标签进行蛋白纯化获得通用亚单位疫苗。本发明制备的亚单位疫苗稳定性好、易于纯化、不含病毒核酸成分，安全性较高，是一种可预防流行的汉坦病毒感染的通用疫苗。

主权项：1.汉滩病毒包膜糖蛋白Gc区亚单位疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，共有序列设计：根据汉滩病毒和汉城病毒M基因高度同源性优势，运用生物信息学方法，获得1条汉滩病毒包膜糖蛋白共有序列，如SEQIDNO.1所示，获得1条汉城病毒包膜糖蛋白共有序列如SEQIDNO.2所示，然后，结合已知汉滩及汉城病毒包膜糖蛋白Gn和Gc的基因序列信息，去除其中的滞留信号TM，分别提取汉滩病毒和汉城病毒的Gn和Gc基因序列的共有序列；S2，目的基因重组质粒的构建：优化合并SEQIDNO.1-SEQIDNO.2所示的两条共有序列获得合并的包膜糖蛋白共有序列，以合并的包膜糖蛋白共有序列为模版，以SEQIDNO.6所示的HTNVGcF和SEQIDNO.7所示的HTNVGcR为引物，PCR扩增获得产物，将产物进行双酶切消化后与已酶切的S2细胞表达载体pMTBipV5-His-A连接，连接产物转化筛选获得目的基因重组质粒；S3，目的蛋白的表达、纯化：将重组质粒转染S2细胞，筛选阳性细胞，诱导蛋白表达，将稳定表达重组蛋白的S2细胞系扩大培养，诱导蛋白表达并纯化，获得通用亚单位疫苗。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国人民解放军空军军医大学;复旦大学附属中山医院 基于汉滩和汉城病毒包膜糖蛋白保守区域设计的通用亚单位疫苗及其制备方法和应用

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