申请/专利权人：江苏大学

申请日：2021-09-02

公开（公告）日：2024-04-09

公开（公告）号：CN113969282B

主分类号：C12N15/115

分类号：C12N15/115;C12N15/10;G01N33/68;G01N27/30

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.09#授权;2022.02.15#实质审查的生效;2022.01.25#公开

摘要：本发明提供了一种VEGF165蛋白探针及其制备方法和应用，属于生物分析技术领域；本发明中，构建了一种自组装免标记磁性纳米肿瘤标志物VEGF165蛋白探针，记为Fe3O4Fe2O3@Au‑DNABSA，该探针可检测浓度的线性范围为0.01‑10pg·mL‑1，检测限为0.01pg·mL‑1SN＝3，定量限为0.03pg·mL‑1SN＝10，其中SN表示信噪比；本发明中还基于该探针构建了一种电化学核酸传感器，在检测VEGF165中有着很好的应用。

主权项：1.一种VEGF165蛋白探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.Fe3O4Fe2O3@Au纳米复合物的制备：（1）将FeNO33·9H2O水溶液静置水解反应，得到橙红色悬浊液，然后离心、洗涤、分散于无水乙醇中得到乙醇悬浊液，将乙醇悬浊液煅烧后研磨，得到磁性Fe3O4Fe2O3异质体纳米颗粒；所述FeNO33·9H2O水溶液的浓度为0.05M-0.5M；所述水解条件为60-90℃下水解2h-16h；所述煅烧为在200℃-400℃下煅烧0.5h-4h；（2）将磁性Fe3O4Fe2O3异质体纳米颗粒超声分散，然后加入HAuCl4溶液，回流加热至沸腾，加入柠檬酸钠溶液反应，然后离心，洗涤，干燥，得到磁性Fe3O4Fe2O3@Au纳米复合物，分散在超纯水中，备用；所述磁性Fe3O4Fe2O3异质体纳米颗粒、HAuCl4和柠檬酸钠的质量比为5:20:114；所述反应时间为40min；S2.Fe3O4Fe2O3@Au-DNABSA的构建：（1）将Fe3O4Fe2O3@Au纳米复合物悬浊液滴加至清洁的MGCE表面，室温下干燥，得到MGCEFe3O4Fe2O3@Au修饰电极；Fe3O4Fe2O3@Au纳米复合物悬浊液的浓度为5-30mgmL，用量为10µL；（2）向MGCEFe3O4Fe2O3@Au修饰电极表面滴加含三（2-羧乙基）膦的巯基修饰的DNA适配体溶液孵育，孵育结束后室温干燥，得到MGCEFe3O4Fe2O3@Au-DNA修饰电极；含三（2-羧乙基）膦的巯基修饰的DNA适配体以TE缓冲液为溶剂，浓度为0.2-1.6µM，用量为5µL；所述三（2-羧乙基）膦的浓度为48μM；所述巯基修饰的DNA适配体的序列为5’-SH-CH26-CAATTGGGCCCGTCCGTATGGTGGGT-3’；所述孵育的条件为4℃下孵育12h（3）向MGCEFe3O4Fe2O3@Au-DNA修饰电极表面滴加牛血清白蛋白反应，反应结束后室温干燥，得到自组装免标记磁性纳米肿瘤标志物VEGF165蛋白探针，记为MGCEFe3O4Fe2O3@Au-DNABSA；所述牛血清白蛋白的用量为2~5μL，其中牛血清白蛋白的体积分数为0.25%，反应条件为4℃下反应30min。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 江苏大学 一种VEGF₁₆₅蛋白探针及其构建方法和应用

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