申请/专利权人：兰州大学

申请日：2024-01-11

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN117871750A

主分类号：G01N30/06

分类号：G01N30/06;G01N30/08;G01N30/14;G01N30/02

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.30#实质审查的生效;2024.04.12#公开

摘要：本发明涉及赖丙氨酸检测技术领域，公开了一种用于赖丙氨酸含量测定的方法，包括以下步骤：预处理：取乳清蛋白样品置于容器中，向所述乳清蛋白样品中注入水解剂，通入氮气后密封容器，升温水解所述乳清蛋白样品，得到氨基酸水解液；衍生化处理：将所述氨基酸水解液冷却至室温，升温蒸发干燥，通过衍生剂，获得样品衍生液；SPE处理：吸取0.1mL样品衍生液，过SPE柱进行淋洗，收集样品SPE洗脱液；HPLC分析：将所述样品SPE洗脱液用乙腈稀释10倍后进行检测。本发明通过预处理、衍生化处理、SPE处理与HPLC分析，获取到乳清蛋白中赖丙氨酸的含量，该检测方法检出限低、检测精度高。

主权项：1.一种用于赖丙氨酸含量测定的方法，其特征在于，包括以下步骤：预处理：取乳清蛋白样品置于容器中，向所述乳清蛋白样品中注入水解剂，通入氮气后密封容器，升温水解所述乳清蛋白样品，得到氨基酸水解液；衍生化处理：将所述氨基酸水解液冷却至室温，升温蒸发干燥，得残留物，取所述残留物溶解于酸碱缓冲液中，然后吸取1mL于容器中，依次加入2mL超纯水、1mL酸碱缓冲液与4mL的衍生剂；混合后，在室温下静置60-120min，获得样品衍生液；SPE处理：吸取0.1mL样品衍生液，以0.5mLmin的上样速度过柱，使10mL第一淋洗液与10mL第二淋洗液依次按照3mLmin的流速注入SPE小柱；每次洗脱液注入后施加20mL空气以干燥小柱；最后，向小柱内注入1.5mL的洗脱液以1mLmin的速度洗脱目标，并向小柱内注入20mL的空气，收集样品SPE洗脱液；其中，第一淋洗液为：乙腈与水按照体积比1:4的比例混合获得；第二淋洗液为：乙腈与水按照体积比1:1的比例混合获得；洗脱液为：乙腈与pH＝8.5-10的0.2molL酸碱缓冲液按照体积比1:1混合获得；HPLC分析：将所述样品SPE洗脱液用乙腈稀释10倍；液相色谱进样量为10μL；柱温设置为25-29℃，流速为0.5mLmin，荧光检测器的激发波长为266nm，衍射波长为310nm。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 兰州大学 一种用于赖丙氨酸含量测定的方法

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