申请/专利权人:东南大学
申请日:2023-12-27
公开(公告)日:2024-04-02
公开(公告)号:CN117802212A
主分类号:C12Q1/6874
分类号:C12Q1/6874
优先权:
专利状态码:在审-实质审查的生效
法律状态:2024.04.19#实质审查的生效;2024.04.02#公开
摘要:本发明公开了一种基于全覆盖捕获芯片的RNA空间甲基化测序方法,本发明利用空间交错编码策略制作全覆盖的空间位置信息编码芯片,进而利用空间原位捕获策略对组织切片进行高通量的全转录组RNA甲基化原位分析,实现了单细胞分辨率下、空间全转录组RNA甲基化的全覆盖,同时保留了甲基化的空间位置信息,提高空间分辨率及降低科研成本,可用于器官或组织的全覆盖精确RNA甲基化转录组图谱或时空图谱的构建。
主权项:1.一种基于全覆盖捕获芯片的RNA空间甲基化测序方法,其特征在于,包括以下步骤:1制备带有化学基团修饰的芯片;2制备双向组合编码芯片:将不同编码的双向引物进行连接并将引物固定在芯片的表面,引物点间距设置为20~50μm;3根据双向组合编码芯片的尺寸制备对应的通孔芯片;4将步骤2中制备好的双向组合编码芯片和步骤3中制备好的通孔芯片进行叠合,使通孔芯片的孔与双向组合编码芯片的编码引物微阵列的点一一对应,形成全覆盖的编码引物微阵列芯片;5将待分析的组织切片与编码引物微阵列芯片相向叠合,使芯片区完全涵盖组织切片的大小,加入透化试剂进行组织固定,反应时施加一定的压力让组织切片与芯片上的引物充分接触并杂交,然后在芯片上进行腺苷脱氨反应、逆转录反应和一链cDNA合成;6将步骤5中所有位点合成的cDNA链整体从玻片上进行切除,并在离心机中旋转玻片收集cDNA链至PCR管中进行文库构建及测序。
全文数据:
权利要求:
百度查询: 东南大学 一种基于全覆盖捕获芯片的RNA空间甲基化测序方法
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