申请/专利权人：青岛海洋科技中心

申请日：2022-06-09

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN115011546B

主分类号：C12N5/071

分类号：C12N5/071;C12N5/0735;A01N1/02

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.12#授权;2024.04.05#著录事项变更;2022.09.23#实质审查的生效;2022.09.06#公开

摘要：本发明提出了一种鱼类细胞体外三维培养、诱导分化和冷冻保存方法。本发明包括以下步骤：1取热可逆聚合物，添加于鱼类细胞溶剂中，于0‑13℃下，溶解0.5‑12h，得热可逆水凝胶；2在0‑13℃下，添加鱼类细胞，共混1‑5min，鱼类细胞的密度为102‑106个mL，升温至14‑38℃；3添加完全培养基进行培养或诱导分化，或进行冷冻保存。本发明利用热可逆水凝胶通过物理交联形成了鱼类细胞三维培养水凝胶体系实现了鱼类细胞体外三维培养、诱导分化和冷冻保存，工艺流程短，方法简单，模拟了真实微环境，满足了鱼类细胞正常生长的需求，不会对鱼类细胞产生破坏作用，不影响鱼类细胞的增殖和分化，后期细胞分离容易。

主权项：1.一种鱼类细胞体外三维培养、诱导分化和冷冻保存方法，其特征在于，包括以下步骤：1）取热可逆聚合物，热可逆聚合物的分子量为2-1500KDa，添加于鱼类细胞溶剂中，于0-13℃下，溶解0.5-12h，得热可逆水凝胶，热可逆水凝胶的质量浓度为0.5-15%，热可逆水凝胶的凝胶化温度为14-38℃，凝胶化时间为30-200s；所述热可逆聚合物为羟丁基壳聚糖和明胶按照质量比为1-5:0.5-5组成的混合物；或者，所述热可逆聚合物为羟丁基壳聚糖和胶原蛋白按照质量比为1-5:0.2-2组成的混合物；或者，所述热可逆聚合物为嵌段共聚物和胶原蛋白按照质量比为3-10:0.5-5组成的混合物；或者，所述热可逆聚合物为嵌段共聚物和明胶按照质量比为3-10:2-8组成的混合物；或者，所述热可逆聚合物为羟丁基壳聚糖、胶原蛋白与明胶按照质量比为0.5-5:0.2-10:0.5-10组成的混合物；2）将步骤1）所得的热可逆水凝胶，在0-13℃下，添加鱼类细胞，共混1-5min，鱼类细胞的密度为102-106个mL，升温至14-38℃，得鱼类细胞三维培养水凝胶体系；3）在步骤2）所得的鱼类细胞三维培养水凝胶体系中添加完全培养基进行培养或诱导分化，或将步骤2）所得的鱼类细胞三维培养水凝胶体系进行冷冻保存；4）移除培养和诱导分化完成之后的完全培养基，或者，在冷冻保存完成之后，复苏，于0-13℃下，静置30-300s，于800-2000rmin转速下，离心2-6min，得目标细胞。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 青岛海洋科技中心 一种鱼类细胞体外三维培养、诱导分化和冷冻保存方法

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