申请/专利权人：金正大生态工程集团股份有限公司;广东清远金正大农业研究院有限公司;菏泽金正大生态工程有限公司

申请日：2022-06-30

公开（公告）日：2023-05-12

公开（公告）号：CN115024338B

主分类号：A01N63/50

分类号：A01N63/50;A01P5/00;A01P1/00;A01P3/00;A01P21/00;A01G13/00;C07K14/36;C12P21/02;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/36;C12R1/54

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.05.12#授权;2022.09.30#实质审查的生效;2022.09.09#公开

摘要：本发明涉及复苏促进因子蛋白在防治农作物重茬病害和促进农作物生长中的应用及应用方法。还提供了一种防治农作物重茬病害和促进农作物生长的方法，可以单独使用复苏促进因子RPF或者将复苏促进因子RPF蛋白与氨基酸和微量元素混合后冲施或者喷施使用。本发明发现通过叶面喷施复苏促进因子蛋白可以有效激活土壤或农作物上休眠的革兰氏阳性菌，促进革兰氏阳性菌快速繁殖，增加土壤和农作物植株上有益菌数量，防治地下或叶部病害，通过地面喷施或冲施复苏促进因子可以有效改良土壤微生态环境，具有防治农作物连作障碍、防治农作物根部土传病害的作用。

主权项：1.复苏促进因子蛋白在防治农作物重茬病害和促进农作物生长中的应用，其特征在于，所述复苏促进因子蛋白的制备方法如下：（1）将菌种保藏编号为CGMCCNo.11963的弗氏链霉菌孢子接种至斜面培养基，在28℃条件下培养7天，加入无菌水，孢子在无菌水内均匀分散，制成浓度为108~109个mL的孢子悬液；（2）将步骤（1）中的孢子悬液接种到液体发酵培养基中，接种量为液体发酵培养基体积的2%，在30℃，转速180r分钟的条件下培养24小时，得到液体发酵种子液；（3）将步骤（2）中的液体发酵种子液接种到液体发酵培养基中，接种量为液体发酵培养基质量的10%，在30℃下培养4天，得到含复苏促进因子蛋白的发酵母液；（4）将步骤（3）中含复苏促进因子蛋白的发酵母液加热至80℃，保温20分钟，然后加入0.1%助滤剂后进行板框过滤，弃去沉淀，所得上清液为含复苏促进因子蛋白的原液；（5）向步骤（4）中含复苏促进因子蛋白的原液中加入硫酸铵，在0℃条件下沉淀4小时，板框压滤后取沉淀，用含8molL尿素的溶液溶解后经梯度透析，采取逐步降低尿素浓度的方法除去蛋白溶液中的尿素，使变性的蛋白在此过程中自然复性，先用含6molL尿素的缓冲液在4℃下透析过夜，然后分别用含4molL、3molL、2molL、1molL、0molL尿素的缓冲液在4℃下各透析4h，透析结束后将蛋白溶液选用弱阴离子交换柱DEAE进行纯化，收集不同梯度洗脱液进行SDS-PAGE分析，最后用PBS缓冲液在4℃下再透析4h，得到复苏促进因子蛋白。

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权利要求：

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