申请/专利权人：上海市质量监督检验技术研究院

申请日：2021-10-29

公开（公告）日：2023-05-23

公开（公告）号：CN113957164B

主分类号：C12Q1/689

分类号：C12Q1/689;C12Q1/6844;C12N15/113

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.05.23#授权;2022.02.15#实质审查的生效;2022.01.21#公开

摘要：本发明公开了一种婴儿配方乳粉中克罗诺杆菌属的CRISPROnePot检测方法，包括：婴儿配方乳粉中克罗诺杆菌属增菌培养；取增菌液提取DNA；以此DNA为模板加入CRISPROnePot反应体系，同时进行LAMP扩增和CRISPR反应；动态检测CRISPR反应荧光强度值，根据荧光强度变化曲线判读待检测样品中是否存在克罗诺杆菌属核酸。本发明还公开了一种用于检测婴儿配方乳粉中克罗诺杆菌属的CRISPROnePot试剂盒及其应用。采用本发明的CRISPROnePot检测方法，操作更加便捷，实现了现场恒温检测，同时可以提高克罗诺杆菌属检测特异性、灵敏度，缩短检测时间。

主权项：1.一种婴儿配方乳粉中克罗诺杆菌属的CRISPROnePot检测方法，其特征在于，包括如下步骤：婴儿配方乳粉中克罗诺杆菌属增菌培养，提取增菌液DNA，以所述DNA为模板加入CRISPROnePot反应体系，同时进行LAMP扩增和CRISPR反应，其中，体系中包括Cas12b蛋白、10×等温扩增缓冲液、10×引物预混液、Bst2.0WarmStartDNA聚合酶、MgSO4、dNTP、sgRNA、甘氨酸和探针；接着，动态检测CRISPR反应荧光强度值，根据荧光强度变化曲线判读待检测样品中是否存在克罗诺杆菌属核酸；所述引物预混液中的特异性引物的核苷酸序列分别如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3、SEQIDNO.4、SEQIDNO.5所示；所述sgRNA和探针的序列分别如SEQIDNO.6和SEQIDNO.7所示。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 上海市质量监督检验技术研究院 一种婴儿配方乳粉中克罗诺杆菌属的CRISPR One Pot检测方法及其试剂盒

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