申请/专利权人：暨南大学附属第一医院(广州华侨医院)

申请日：2023-08-03

公开（公告）日：2023-10-27

公开（公告）号：CN116941578A

主分类号：A01K67/027

分类号：A01K67/027;C12N15/85;C12N15/89;C12N15/113;C12N15/12;A61K49/00

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.11.14#实质审查的生效;2023.10.27#公开

摘要：本发明公开了一种原发性牙齿萌出障碍的PTH1R基因点突变小鼠模型的构建方法，包括以下步骤：基于目标基因PTH1Rc.1325_1336del突变位点设计gRNA；根据所述gRNA序列设计供体寡核苷酸供体DNA；将小鼠Pth1r基因的gRNA、含有c.1325_1336del突变的供体DNA和Cas9共同注射到小鼠受精卵中，再将受精卵移植到假孕母鼠子宫中，获得F0代小鼠；经PCR和测序验证正确的F0代阳性杂合子小鼠与C57BL6JGpt小鼠交配获得可稳定遗传的阳性F1代小鼠，F1代杂交得到F2，经基因测序验证得到Pth1r基因c.1325_1336del的原发性牙齿萌出障碍小鼠模型。本发明的动物模型为研究PTH1R基因c.1325_1336del突变人群PFE的发病机制的理想载体，弥补了现有动物模型的不足，为PFE相关的发病机制及干预研究提供了良好的基础，可以为PFE的相关研究提供更加深入的见解。

主权项：1.一种原发性牙齿萌出障碍的PTH1R基因点突变小鼠模型的构建方法，其特征在于包括以下步骤：1基于目标基因PTH1Rc.1325_1336del突变位点设计gRNA；2根据所述gRNA序列设计供体寡核苷酸供体DNA；3将小鼠Pth1r基因的gRNA、含有c.1325_1336del突变的供体DNA和Cas9共同注射到小鼠受精卵中，再将受精卵移植到假孕母鼠子宫中，获得F0代小鼠；4经PCR和测序验证，将所述F0代小鼠划分为野生型小鼠或阳性杂合子小鼠，然后将所述阳性杂合子小鼠与C57BL6JGpt小鼠交配获得可稳定遗传的阳性F1代小鼠；5将所述F1代小鼠杂交得到F2代小鼠，通过基因鉴定可获得3种Pth1r基因型：Pth1r野生型、Pth1r突变杂合子、Pth1r突变纯合子。

全文数据：

权利要求：

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