申请/专利权人：华南农业大学;广东华活之光生物科技有限公司

申请日：2023-08-29

公开（公告）日：2023-12-12

公开（公告）号：CN117204398A

主分类号：A01K67/033

分类号：A01K67/033;G01N33/68;C12Q1/30;C12Q1/26;G01N21/64

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.12.29#实质审查的生效;2023.12.12#公开

摘要：本发明涉及食品、化妆品原料领域，公开了一种基于秀丽线虫模型评价蛋清蛋白多肽抗氧化、抗衰老的方法，所述蛋清蛋白多肽的抗氧化、抗衰老活性评价方法包括：培养基制备、线虫培养和同期化、百草枯氧化应激寿命测定、H2O2氧化应激寿命测定、抗氧化酶活性测定、正常寿命测定、脂褐素含量测定和产卵量测定等步骤。本发明是基于秀丽线虫模型评价蛋清蛋白多肽抗氧化、抗衰老的方法，具有操作方便、成本低、周期短等特点，能高效评价蛋清蛋白多肽在生物体内的作用，反映生物学意义。

主权项：1.一种基于秀丽线虫模型评价蛋清蛋白多肽抗氧化、抗衰老的方法，主要包括以下几个步骤：S1、培养基制备：配制线虫生长固体培养基、LB液体培养基、LB固体培养基，百草枯培养基，灭菌备用；S2、线虫培养和同期化：取E.coliOP50的菌种于LB平板划线,挑取单菌落于LB液体培养基中培养至一定菌液浓度后，涂布于NGM板。将冻存的线虫复苏后接种于NGM板，待线虫产卵后用M9缓冲溶液和裂解液清洗和裂解成虫，在超净工作台上，用移液器吸取适量线虫的卵滴于涂有E.coliOP50的NGM板上，置于20℃培养箱培养3天，完成同期化培养；S3、百草枯氧化应激寿命测定：将S2得到的线虫挑取到实验组和对照组平板中，每组150-300条虫，放置在20℃-25℃的培养箱中，培养72h-120h，再将线虫转移到5-30mmolL百草枯培养基中，每天记录各组平板线虫的死亡情况和剩余线虫数量，并挑去死亡线虫，直到所有线虫死亡；S4、H2O2氧化应激寿命测定：将S2得到的线虫挑取到实验组和对照组平板中，每组150-300条虫，放置在20℃-25℃的培养箱中，培养72h-120h，将10％-60％H2O2稀释1000倍后均匀涂在菌液上，再把线虫转移到含有H2O2的NGM培养基上，每30min记录线虫的死亡情况和剩余线虫数量，并挑去死亡线虫，直至全部线虫死亡；S5、抗氧化酶活性测定：将S2得到的线虫挑取到实验组和对照组平板中，每组150-300条虫，放置在20℃-25℃的培养箱中，培养72h-120h，用M9缓冲液配成体积比为5％-30％的线虫匀浆溶液，提取线虫组织蛋白，用试剂盒测蛋白质含量、过氧化氢酶酶活、超氧化物歧化酶酶活、还原型谷胱甘肽酶活、丙二醛含量；S6、正常寿命测定：将S2得到的线虫挑取到实验组和对照组平板中，每组150-300条虫，放置在20℃-25℃的培养箱中，当天视为第0天，而后每天将线虫转移至新的实验组和对照组平板中，每天记录线虫的死亡情况和剩余线虫数量，并挑去死亡线虫，直至全部线虫死亡；S7、脂褐素含量测定：将S2得到的线虫挑取到实验组和对照组平板中，每组150-300条虫，放置在20℃-25℃的培养箱中，培养72h-168h，用1％-20％NaN3麻醉线虫，再放入滴有3％-20％琼脂糖垫的载玻片上。用倒置荧光显微镜观察并拍摄照片，ImageJ软件测量荧光强度；S8、产卵量测定：将S2得到的线虫挑取到实验组和对照组平板中，每组10-30条虫，放置在20℃-25℃的培养箱中，从当天视为第0天，每间隔24h后将线虫挑至到新的实验组和对照组平板中，一直到线虫不再产卵将停止。产卵的板放入20℃-25℃的培养箱中培养24h-72h后记录线虫的数量。

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