申请/专利权人：大鹏药品工业株式会社

申请日：2018-05-07

公开（公告）日：2024-04-09

公开（公告）号：CN109959733B

主分类号：G01N30/02

分类号：G01N30/02;G01N30/89

优先权：["20171222 JP 2017-246043"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.09#授权;2020.12.25#实质审查的生效;2019.07.02#公开

摘要：本发明涉及源自曲氟尿苷及或替吡嘧啶的类似物质的检测方法。本发明的课题是提供可在同一步骤中对含有曲氟尿苷或其盐、以及替吡嘧啶或其盐的试样中所包含的源自曲氟尿苷的类似物质、源自替吡嘧啶的类似物质进行检测的方法。本发明的解决手段为：用于检测源自曲氟尿苷的类似物质及源自替吡嘧啶的类似物质中的一方或两方的方法，所述方法包括将含有曲氟尿苷或其盐、以及替吡嘧啶或其盐的试样供于高效液相色谱法的步骤，所述高效液相色谱法中使用包含有机相及水相的流动相。

主权项：1.用于检测源自曲氟尿苷的类似物质及源自替吡嘧啶的类似物质的两方的方法，所述方法包括将含有曲氟尿苷或其盐、以及替吡嘧啶或其盐的试样供于高效液相色谱法的步骤，所述高效液相色谱法中使用包含有机相及水相的流动相，其中，所述类似物质为全部下述类似物质1～5：类似物质1：三氟胸腺嘧啶；类似物质2：2-亚氨基吡咯烷；类似物质3：5-氯-6-{2-氧代吡咯烷-1-基甲基}嘧啶-2,4-1H,3H-二酮；类似物质4：2’-脱氧-5-甲氧基羰基尿苷；和类似物质5：5-羧基尿嘧啶，并且，在类似物质1～5、曲氟尿苷及替吡嘧啶的保留时间内，有机相相对于流动相整体的比例均为7～15容量％，水相包含磷酸或其盐或者它们的混合物，流动相的pH为2.0～5.0，流动相包含1-庚磺酸或其盐，所述有机相包含甲醇，在类似物质1、3、4及曲氟尿苷的保留时间内的有机相相对于流动相整体的比例中，最大值与最小值之差为流动相整体的5容量％以下，柱为十八烷基甲硅烷基化硅胶色谱柱。

全文数据：源自曲氟尿苷及或替吡嘧啶的类似物质的检测方法技术领域本发明涉及在含有曲氟尿苷及替吡嘧啶的制剂中所包含的、这些物质的类似物质的测定方法。背景技术一般而言，医药品的类似物质利用液相色谱法进行测定，经常使用将水及有机溶剂的混合液作为流动相的正相色谱柱体系或反相色谱柱体系。作为申请人的制品的Lonsurf日文为“ロンサーフ”注册商标为含有曲氟尿苷及替吡嘧啶的制剂。该含有曲氟尿苷及替吡嘧啶的医药品已作为抗肿瘤药进行销售，关于该制剂已有多项报道专利文献1、2、3、4。而且，作为曲氟尿苷的类似物质，5-三氟甲基尿嘧啶三氟胸腺嘧啶及5-羧基尿嘧啶是已知的，已报道了使用高效液相色谱法对它们进行测定非专利文献1。另外，作为替吡嘧啶的类似物质，5-氯-6-{2-氧代吡咯烷-1-基甲基}嘧啶-2,4-1H,3H-二酮作为替吡嘧啶的合成中间体是已知的专利文献5。已报道了用于测定作为曲氟尿苷的类似物质的5-三氟甲基尿嘧啶的、使用了乙腈的各种高效液相色谱法的条件非专利文献2。已报道了用于测定曲氟尿苷向肿瘤细胞中的摄入的、使用了乙腈的高效液相色谱法的条件非专利文献3。已报道了用于判断曲氟尿苷的TK1的底物特异性的、使用了乙腈的高效液相色谱法的条件非专利文献4。已报道了用于确认酶合成中的曲氟尿苷的、添加三甲基乙酸铵并设置梯度的高效液相色谱法的条件非专利文献5。已报道了用于定量测定Lonsurf中含有的曲氟尿苷和替吡嘧啶的、使用了乙腈的高效液相色谱法的条件非专利文献6、7、8。关于滴眼剂形式的曲氟尿苷，已报道使用了甲醇的高效液相色谱法的条件非专利文献9、10。关于曲氟尿苷，已报道使用了添加有乙酸缓冲液、三氟乙酸或乙酸的流动相的高效液相色谱法的条件非专利文献11、12、专利文献6、13。另外，虽为了确认曲氟尿苷的纯度而在使用高效液相色谱法，但其条件未有记载专利文献7。为了测定血浆中的替吡嘧啶，使用了添加有乙酸铵的甲醇的高效液相色谱法的条件非专利文献13及使用了乙腈的条件非专利文献14已有报道。此外，作为替吡嘧啶的合成中间体，5-氯-6-氯甲基嘧啶-2,41H,3H-二酮是已知的专利文献4。为对该医药品进行生产管理，需要能使主要成分的峰与它们的类似物质的峰相分离、且在短时间内以良好的重现性进行分析。但是，迄今为止，并没有报道过利用同一条件的高效液相色谱法对源自曲氟尿苷及替吡嘧啶的类似物质进行检测的方法。另外，2’-脱氧-5-甲氧基羰基尿苷是在该含有曲氟尿苷及替吡嘧啶的医药品中可能包含的类似物质这点也尚属未知。现有技术文献专利文献专利文献1：WO2013122134专利文献2：WO2013122135专利文献3：WO2006080327专利文献4：WO9630346专利文献5：CN106749194A专利文献6：CN105198947A专利文献7：CN105461772A专利文献8：日本专利4603274专利文献9：日本专利4441313专利文献10：日本专利4437786非专利文献非专利文献1：P.Horsch等，InternationalJournalofPharmaceutics2222001，p.205-215非专利文献2：D.V.Moiseev等，PharmaceuticalChemistryJournal41，12007，p.25-33非专利文献3：N.TANAKA等，OncologyReports322014，p.2319-2326非专利文献4：K.SAKAMOTO等，InternationalJournalofOncology462015，p.2327-2334非专利文献5：A.Fresco-Taboada等，CatalysisToday2592015，p.197-204非专利文献6：M.S.H.Rizwan等，InternationalJournalofInnovativePharmaceuticalSciencesandResearch52017，p.32-42非专利文献7：S.GODAY等，InternationalJournalofResearchinApplied,NaturalandSocialSciences52017，p.93-104非专利文献8：K.Jogi等，InternationalJournalofResearchinPharmacyandChemistry72017，p.63-70非专利文献9：B.Paw等，Pharmazie71997，p.551-552非专利文献10：T.Briggle等，JournalofChromatography3811986，p.343-355非专利文献11：M.Riegel等，JournalofChromatography5681991，p.467-474非专利文献12：G.Balansard等，JournalofChromatography3481985，p.299-303非专利文献13：T.Kawauchi等，JournalofChromatography7512001，p.325-330非专利文献14：J.Lee等，CancerChemotherPharmacol772016，p.515-526发明内容发明所要解决的课题本发明所要解决的课题为提供可在同一步骤中对含有曲氟尿苷或其盐、以及替吡嘧啶或其盐的试样中所包含的源自曲氟尿苷的类似物质、源自替吡嘧啶的类似物质进行检测的方法。用于解决课题的手段本申请的发明人进行了深入研究，结果发现了下述方法：所述方法中，通过将含有曲氟尿苷或其盐、以及替吡嘧啶或其盐的试样供于高效液相色谱法所述高效液相色谱法中使用包含有机相及水相的流动相，从而可使用同一方法对源自曲氟尿苷或替吡嘧啶的类似物质进行检测，而不是使用不同的方法对源自曲氟尿苷或替吡嘧啶的类似物质进行检测。因此，本发明典型地提供以下[1]～[12]。[1]用于检测源自曲氟尿苷的类似物质及源自替吡嘧啶的类似物质中的一方或两方的方法，所述方法包括将含有曲氟尿苷或其盐、以及替吡嘧啶或其盐的试样供于高效液相色谱法的步骤，所述高效液相色谱法中使用包含有机相及水相的流动相。[2]如[1]所述的方法，其中，所述类似物质为选自由下述类似物质1～5组成的组中的至少一种：类似物质1：三氟胸腺嘧啶；类似物质2：2-亚氨基吡咯烷；类似物质3：5-氯-6-{2-氧代吡咯烷-1-基甲基}嘧啶-2,4-1H,3H-二酮；类似物质4：2’-脱氧-5-甲氧基羰基尿苷；类似物质5：5-羧基尿嘧啶。[3]如[2]所述的方法，其中，所述类似物质包含类似物质3，并且，类似物质3和曲氟尿苷在高效液相色谱法中的保留时间相差1.0分钟以上。[4]如[2]或[3]所述的方法，其中，在类似物质1～5、曲氟尿苷及替吡嘧啶的保留时间内，有机相相对于流动相整体的比例均为7～15容量％。[5]如[1]～[4]中任一项所述的方法，其中，所述有机相包含甲醇。[6]如[1]～[5]中任一项所述的方法，其中，水相包含磷酸或其盐或者它们的混合物。[7]如[2]～[6]中任一项所述的方法，其中，在类似物质1、3、4及曲氟尿苷的保留时间内的有机相相对于流动相整体的比例中，最大值与最小值之差为流动相整体的5容量％以下。[8]如[1]～[7]中任一项所述的方法，其中，流动相的pH为2.0～5.0。[9]如[1]～[8]中任一项所述的方法，其中，流动相包含1-庚磺酸或其盐。[10]2’-脱氧-5-甲氧基羰基尿苷类似物质4，其用于含有曲氟尿苷或其盐、以及替吡嘧啶或其盐的复方制剂的品质管理。[11]2’-脱氧-5-甲氧基羰基尿苷类似物质4，其用作检测含有曲氟尿苷或其盐、以及替吡嘧啶或其盐的复方制剂中的杂质时的标准品。[12]2’-脱氧-5-甲氧基羰基尿苷类似物质4的制造方法，其特征在于，从含有曲氟尿苷或其盐、以及替吡嘧啶或其盐的复方制剂中进行分离。发明效果根据本发明，可使用同一方法对含有曲氟尿苷或其盐、以及替吡嘧啶或其盐的试样中所包含的源自曲氟尿苷的类似物质及源自替吡嘧啶的类似物质进行检测。因此，利用本发明的方法，能够简便且迅速地对含有曲氟尿苷或其盐、以及替吡嘧啶或其盐的制剂进行品质管理。附图说明[图1]示出了实施例1的色谱图。[图2]示出了实施例10的色谱图。具体实施方式本发明中的替吡嘧啶TPI是指5-氯-6-2-亚氨基吡咯烷-1-基甲基-2,41H,3H-嘧啶二酮，即具有下述结构的化合物。[化学式1]本发明中的曲氟尿苷FTD是指α,α,α-三氟胸苷，即具有下述结构的化合物。[化学式2]本发明中，曲氟尿苷及替吡嘧啶具有光学异构体、立体异构体、旋转异构体、互变异构体等异构体时，只要没有明确记载，则使用任意异构体、以及它们与替吡嘧啶及或曲氟尿苷的混合物作为试样的方法均包括在本发明中。本发明中，只要没有特别地明确记载例外的情况，则盐的含义为药学上允许的盐，可举出碱加成盐或酸加成盐。作为该碱加成盐，可举出例如钠盐、钾盐等碱金属盐；例如钙盐、镁盐等碱土金属盐；例如铵盐；例如三甲胺盐、三乙胺盐、二环己胺盐、乙醇胺盐、二乙醇胺盐、三乙醇胺盐、普鲁卡因盐、N,N’-二苄基乙二胺盐等有机胺盐等。作为该酸加成盐，可举出例如盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、高氯酸盐等无机酸盐；例如乙酸盐、甲酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、抗坏血酸盐、三氟乙酸盐等有机酸盐；例如甲磺酸盐、羟乙基磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐等磺酸盐；等等。作为本发明中使用的曲氟尿苷或其盐，优选为未形成盐的曲氟尿苷的游离体。另外，作为本发明中使用的替吡嘧啶或其盐，优选为替吡嘧啶盐酸盐。作为本发明中使用的含有曲氟尿苷或其盐、以及替吡嘧啶或其盐的试样，优选为含有曲氟尿苷的游离体及替吡嘧啶盐酸盐的试样。本发明的方法是对含有曲氟尿苷或其盐、以及替吡嘧啶或其盐的试样进行一次高效液相色谱法测定而非多次测定就能够检测出这些成分的类似物质的方法。需要说明的是，只要是在试样中含有源自曲氟尿苷的类似物质及源自替吡嘧啶的类似物质这两方时能够在一次测定中对上述两方进行检测的方法，则即使因为试样中仅含有源自曲氟尿苷的类似物质及源自替吡嘧啶的类似物质中的一方、或不含类似物质，而导致结果未检测出上述两方的类似物质，这样的方法也仍然被涵盖在本发明中。本发明中的试样可能含有源自曲氟尿苷或替吡嘧啶的类似物质。作为类似物质，可举出类似物质1～6的化合物。[表1]类似物质1为三氟胸腺嘧啶，是源自曲氟尿苷的类似物质。有时也称为5-三氟甲基嘧啶-2,41H,3H-二酮。类似物质2为2-亚氨基吡咯烷，是源自替吡嘧啶的类似物质。类似物质3为5-氯-6-{2-氧代吡咯烷-1-基甲基}嘧啶-2,4-1H,3H-二酮，是源自替吡嘧啶的类似物质。类似物质4为2’-脱氧-5-甲氧基羰基尿苷，是源自曲氟尿苷的类似物质。有时也称为1-2R,4R,5R-4-羟基-5-羟基甲基四氢呋喃-2-基-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-甲酸甲酯。类似物质5为5-羧基尿嘧啶，是源自曲氟尿苷的类似物质。有时也称为2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-甲酸。类似物质6为5-氯-6-氯甲基嘧啶-2,41H,3H-二酮，是源自替吡嘧啶的类似物质。作为本发明中使用的试样，不仅可使用由制剂或原料药日语为“原薬”本身而制备的试样，还可使用在用于确认稳定性等的试验中制备的试样、为了确认各类似物质的保留时间色谱图的峰等而添加有各类似物质的试样、为了确认制剂或原料药的制造工序而制备的试样等。本发明可使用的制剂有时也记为复方制剂、组合物等中含有曲氟尿苷或其盐、以及替吡嘧啶或其盐。并且，可根据需要配合药学上允许的载体，基于预防目的或治疗目的而采用各种施予形态，作为该形态，例如口服剂、注射剂、栓剂、软膏剂、贴剂等均可，优选采用口服剂。这些施予形态可分别利用本领域技术人员已知惯用的制剂方法来制造。作为药学上允许的载体，可使用作为制剂原料而惯用的各种有机或无机载体物质，并作为固体制剂中的赋形剂、粘结剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、液体制剂中的溶剂、助溶剂、混悬剂、等渗剂、缓冲剂、镇痛剂等进行配合。另外，也可根据需要而使用防腐剂、抗氧化剂、着色剂、甜味剂、稳定剂等制剂添加物。制备口服用固体制剂的情况下，可以向本发明化合物中添加赋形剂、并根据需要而添加粘结剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、矫味·矫臭剂等，然后利用常规方法制造片剂、包衣片剂、颗粒剂、散剂、胶囊剂等。另外，具有上述施予形态的药剂的每日施予量可根据患者的症状、体重、年龄、性别等适当确定。本发明所使用的高效液相色谱法中，可使用通常市售的产品。高效液相色谱法中，可通过将有机相及水相进行混合而作为流动相、并将该流动相注入色谱柱中从而用于医药品的分析。本发明中，由于试样中含有曲氟尿苷或其盐、以及替吡嘧啶或其盐，因此，以曲氟尿苷、替吡嘧啶各自为基础的测定条件是必需的。若能够在一个高效液相色谱法的测定条件下对曲氟尿苷、源自曲氟尿苷的类似物质、替吡嘧啶、源自替吡嘧啶的类似物质进行测定，则对品质管理非常有用。关于色谱法中使用的色谱柱，将有机相作为流动相来分离具有脂溶性的化合物的正相色谱柱、和将水相作为流动相来分离化合物的反相色谱柱是已知的，高效液相色谱法中多使用反相色谱柱，本发明中也优选反相色谱法。本发明中可使用的高效液相色谱法的色谱柱选自硅胶色谱柱、表面利用十八烷基甲硅烷基进行了修饰的硅胶色谱柱ODS色谱柱或C18色谱柱、表面利用辛基进行了修饰的硅胶色谱柱C8色谱柱、表面利用氰基丙基进行了修饰的硅胶色谱柱CN色谱柱、表面利用苯乙基进行了修饰的硅胶色谱柱Ph色谱柱、表面利用氨基丙基进行了修饰的硅胶色谱柱NH色谱柱、表面利用二羟基丙基进行了修饰的硅胶色谱柱Diol色谱柱、填充有各种聚合物的色谱柱聚合物色谱柱、填充有离子交换树脂的色谱柱离子交换色谱柱等，本发明中优选ODS色谱柱。作为ODS色谱柱，可使用硅胶的粒径、细孔径、十八烷基甲硅烷基的键合方法、十八烷基甲硅烷基的取代度等不同的各种色谱柱。本发明中，硅胶的平均粒径例如优选为2～10μm，更优选为3～5μm。硅胶的平均粒径可利用激光衍射法等进行测定。硅胶的平均细孔径例如优选为6～20nm，更优选为8～13nm。硅胶的平均细孔径可利用气体吸附法等进行测定。作为硅胶中的十八烷基甲硅烷基的键合方式，例如单体方式、聚合方式等是优选的。硅胶的碳量例如优选为3～25％，更优选为8～25％，进一步优选为10～20％。硅胶的碳量可利用各种方法进行测定。本发明中，从改善作为碱性化合物的替吡嘧啶及其类似物质的峰形状、以及分离容易性的观点考虑，优选为用低分子的甲硅烷基化剂对十八烷基化后残留的硅烷醇进行处理而得到的ODS色谱柱经封端的ODS色谱柱，更优选为以碳量成为10％以上的方式进行封端而得到的ODS色谱柱。特别优选为Wakosil-II5C18RS和光纯药制或InertsilODS-4GLSciences日语为“サイエンス”公司制。作为高效液相色谱法的流动相中使用的有机相，可使用己烷、环己烷、庚烷、乙醚、四氢呋喃、氯仿、二氯甲烷等非极性溶剂；丙酮、二甲基亚砜、乙腈等非质子性极性溶剂；乙酸、甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈等。这些溶剂可单独使用一种，或以混合溶剂的形式使用两种以上。作为本发明中的有机相，优选为甲醇或乙腈，更优选为甲醇。另外，有机相中可包含10％以下的水。关于高效液相色谱法的流动相所使用的水相，不是只能仅包含水，还可包含10％以下的上述有机溶剂，但优选仅包含水。高效液相色谱法的流动相中，从确保重现性的观点考虑，可添加各种缓冲剂。可添加例如乙酸或其盐、柠檬酸或其盐、酒石酸或其盐、磷酸或其盐。作为乙酸或其盐，可举出乙酸、乙酸钠。作为柠檬酸或其盐，可举出柠檬酸、柠檬酸一钠、柠檬酸二钠、柠檬酸三钠。对于酒石酸或其盐而言，可举出酒石酸、酒石酸钠，作为磷酸或其盐，可举出磷酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾。作为本发明中的水相的添加剂，从测定物质所具有的性质、在测定时得到的峰的形状及测定的重现性的观点考虑，优选为磷酸或其盐，更优选为磷酸、磷酸二氢钠。这些添加剂可单独使用一种，或者组合使用两种以上。对于本发明中可使用的缓冲剂的浓度而言，只要是在高效液相色谱法的测定中缓冲剂不析出的浓度即可，可进行适当调节。优选为1～50mM，更优选为5～20mM，特别优选为9～11mM。高效液相色谱法的流动相中，可使用有机相与水相的混合液。本发明中，在选自由类似物质1、3、4及曲氟尿苷组成的组中的一种或两种以上物质的保留时间优选地，类似物质1、3、4及曲氟尿苷的保留时间内，有机相相对于流动相整体的比例优选为流动相整体的5～20容量％，更优选为7～15容量％。另外，本发明中，特别优选的是，在类似物质1、2、3、4、曲氟尿苷及替吡嘧啶的保留时间内，有机相相对于流动相整体的比例均为7～15容量％。本发明中，更优选的是，流动相包含甲醇及水相，并且在选自由类似物质1、3、4及曲氟尿苷组成的组中的一种或两种以上物质的保留时间优选地，类似物质1、3、4及曲氟尿苷的保留时间内，甲醇相对于流动相整体的比例为流动相整体的5～20容量％。更优选的是，流动相包含甲醇及水相所述水相包含磷酸或磷酸二氢钠，并且在选自由类似物质1、3、4及曲氟尿苷组成的组中的一种或两种以上物质的保留时间优选地，类似物质1、3、4及曲氟尿苷的保留时间内，甲醇相对于流动相整体的比例为流动相整体的5～20容量％。特别优选的是，流动相包含甲醇及水相所述水相包含磷酸或磷酸二氢钠，并且在选自由类似物质1、3、4及曲氟尿苷组成的组中的一种或两种以上物质的保留时间优选地，类似物质1、3、4及曲氟尿苷的保留时间内，甲醇相对于流动相整体的比例为流动相整体的7～15容量％。高效液相色谱法的流动相中，可使用有机相与水相的混合液，在测定中改变它们的比例的情况很多，这被称为设置梯度。通常，考虑到目标化合物的保留时间、以及目标化合物与类似物质的分离而设置梯度的情况很多。本发明中，在类似物质1、3、4及曲氟尿苷的保留时间内，有机相相对于流动相整体的比例中的最大值与最小值之差优选为流动相整体的5容量％以下，特别优选为1容量％以下，特别更优选为等度状态。另外，本发明中，优选使测定时间中的有机相相对于流动相整体的比例的变化测定时间中的有机相相对于流动相整体的比例中，最大值与最小值之差为流动相整体的5容量％以下，特别优选为1容量％以下，特别更优选为等度状态。本发明中，除了上述添加剂以外，还可添加离子对试剂，其对于在色谱柱中保持类似物质而言起到重要作用。关于离子对试剂，可使用：丙磺酸钠、丁磺酸钠、戊磺酸钠、己磺酸钠、庚磺酸钠、辛磺酸钠、十二烷基磺酸钠等烷基磺酸钠优选碳原子数7～12的直链或支链状烷基磺酸钠；十二烷基硫酸钠；四乙基氢氧化铵、四丁基氢氧化铵、四丁基氯化铵、四丁基溴化铵等季铵盐；三己胺、三辛胺等叔胺。作为本发明中的离子对试剂，优选为碳原子数7～12的直链或支链状烷基磺酸钠，更优选为庚磺酸钠。这些离子对试剂可单独使用一种，或者组合使用两种以上。本发明中的流动相的pH可利用上述添加剂等适当调节，优选为2.0～5.0，更优选为2.6～2.8。本发明的方法中可使用的检测波长可考虑各类似物质的性质而设为205～230nm，优选为208～220nm，更优选为208～212nm。本发明的方法中可使用的色谱柱内流动相的温度可适当设定。考虑到外部环境的影响、重现性等，优选将该温度保持恒定，更优选为25～50℃，进一步优选为35～45℃，特别优选为38～42℃。需要说明的是，将该温度保持恒定时，不仅可以控制色谱柱整体的温度，还可使用预加热混合机preheatmixer等。本发明中的高效液相色谱法中，可适当变更流动相的流速、注入量等。本发明中，流动相的流速没有特别限定，优选为0.5～2.0mL分钟，更优选为0.7～1.3mL分钟。本发明的类似物质可利用已知方法进行合成，或者可通过市售品而获得。通过将由此得到的类似物质在高效液相色谱法中的保留时间、根据质谱法、光电二极管阵列PDA得到的结果与通过本发明检测到的类似物质的上述指标进行比较，可对类似物质进行确定。此外，也可利用采用外标的方法、采用内标的方法中的任何方法对上述类似物质进行定量测定。医药品、制剂中可能以杂质的形式含有上述类似物质的情况下，上述类似物质是根据国际人用药品注册技术协调会日文：医药品規制調和国際会議的指南ICH-Q3而被控制的物质。本发明的方法能够确认是否满足该指南的基准，因此非常有用。另外，上述类似物质可通过本发明的方法从曲氟尿苷或其盐、替吡嘧啶或其盐中检测出。进而，本发明中，可以将类似物质1～5中的一种或两种以上作为标准品而用于品质管理，优选为类似物质4。用于这样的标准品的曲氟尿苷、替吡嘧啶、及源自它们的类似物质是高纯度的物质。作为标准品的纯度，优选为99.0％以上，更优选为99.9％以上。因此，基于该高效液相色谱法的条件而分离得到的各类似物质可用作标准品。因此，本发明也可以说是该类似物质的制造方法，其特征在于，从含有曲氟尿苷或其盐、以及替吡嘧啶或其盐的复方制剂中进行分离。该类似物质可举出上述类似物质1～5，优选为类似物质4。本发明中的源自曲氟尿苷或替吡嘧啶的类似物质的检测中，可使用基于高效液相色谱法的方法。优选为使用下述高效液相色谱法的方法：所述高效液相色谱法中，在类似物质1、3、4、曲氟尿苷的保留时间内，有机相为流动相整体的5～20容量％。更优选为利用下述高效液相色谱法的方法：所述高效液相色谱法中，流动相包含甲醇及水相，并且，在类似物质1、3、4、曲氟尿苷的保留时间内，甲醇为流动相整体的5～20容量％。更优选为利用下述高效液相色谱法的方法：所述高效液相色谱法中，流动相包含甲醇、以及含有磷酸或磷酸二氢钠的水相，并且，在类似物质1、3、4、曲氟尿苷的保留时间内，甲醇为流动相整体的5～20％。更优选为利用下述高效液相色谱法的方法：所述高效液相色谱法中，流动相包含甲醇、以及含有磷酸或磷酸二氢钠的水相，并且，在类似物质1、3、4、曲氟尿苷的保留时间内，甲醇为流动相整体的7～15％。更优选为利用下述高效液相色谱法的方法：所述高效液相色谱法中，流动相包含甲醇、以及含有磷酸或磷酸二氢钠的水相，在类似物质1、3、4、曲氟尿苷的保留时间内，甲醇为流动相整体的7～15％，并且，使在测定时间中的有机相与水相的比例的变化为流动相整体的5％以下。更优选为利用下述高效液相色谱法的方法：所述高效液相色谱法中，流动相包含甲醇、以及含有磷酸或磷酸二氢钠的水相，在类似物质1、3、4、曲氟尿苷的保留时间内，甲醇为流动相整体的7～15％，使在测定时间中的有机相与水相的比例的变化为流动相整体的5％以下，并且，使用1-庚磺酸钠作为离子对试剂。本发明中，曲氟尿苷及替吡嘧啶的保留时间过短时，无法分离类似物质1～5。另外，曲氟尿苷及替吡嘧啶的保留时间过长时，导致测定时间需要较长的时间。本发明中，曲氟尿苷的保留时间可举出5～30分钟，优选为5～20分钟。另外，本发明中，替吡嘧啶的保留时间可举出5～30分钟，优选为10～25分钟。本发明中，关于类似物质1和类似物质4，存在高效液相色谱法中的保留时间非常接近的趋势。为了避免这种趋势，类似物质1与类似物质4的保留时间之差可举出0.2分钟以上，优选为0.4分钟以上，更优选为0.5分钟以上。另外，关于类似物质3和曲氟尿苷，也存在高效液相色谱法中的保留时间非常接近的趋势。为了避免这种趋势，类似物质3与曲氟尿苷的保留时间之差可举出0.2分钟以上，优选为0.5分钟以上，更优选为1.0分钟以上。此外，因为本发明能够检测源自曲氟尿苷及源自替吡嘧啶的类似物质，因此，分别地，其也可从曲氟尿苷或其盐中仅检测源自曲氟尿苷的类似物质，以及同样地，其可从替吡嘧啶或其盐中仅检测源自替吡嘧啶的类似物质。从曲氟尿苷或其盐中仅检测源自曲氟尿苷的类似物质的方法遵循上文所述的用于从曲氟尿苷或其盐、以及替吡嘧啶或其盐中检测源自曲氟尿苷的类似物质或源自替吡嘧啶的类似物质中的一方或两方的方法来进行，优选的实施方式与该方法相同。从替吡嘧啶或其盐中仅检测源自替吡嘧啶的类似物质的方法遵循上文所述的用于从曲氟尿苷或其盐、以及替吡嘧啶或其盐中检测源自曲氟尿苷的类似物质或源自替吡嘧啶的类似物质中的一方或两方的方法来进行。因此，以下所示的事项以外的实施方式可采用上述实施方式。将本发明用于从替吡嘧啶或其盐中仅检测源自替吡嘧啶的类似物质的方法时，作为高效液相色谱法中使用的色谱柱，可使用与上述相同的色谱柱，优选为ODS色谱柱，更优选为Wakosil-II5C18RS和光纯药制或InertsilODS-3GLSciences公司制。作为高效液相色谱法的流动相中使用的有机相，可使用上述有机溶剂，优选为甲醇或乙腈，更优选为乙腈。高效液相色谱法的流动相所使用的水相中，不是只能仅包含水，还可以包含10％以下的有机溶剂，但优选仅包含水。高效液相色谱法的流动相中，从确保重现性的观点考虑，可添加各种缓冲剂。作为可添加的缓冲剂，可举出上述添加剂，优选为磷酸或其盐，更优选为磷酸二氢钾。关于缓冲剂的浓度，可以以上述浓度进行使用，优选为1～50mM，更优选为2～20mM，特别优选为3～10mM。高效液相色谱法的流动相中，可使用上述有机相与水相的混合液，在类似物质3或替吡嘧啶的保留时间优选类似物质3及替吡嘧啶的保留时间内，有机相相对于流动相整体的比例优选为流动相整体的5～20容量％，更优选为7～15容量％。高效液相色谱法的流动相中，更优选的是，流动相包含乙腈及水相，并且，在类似物质3或替吡嘧啶的保留时间优选类似物质3及替吡嘧啶的保留时间内，乙腈相对于流动相整体的比例为流动相整体的5～20容量％。更优选的是，流动相包含乙腈以及水相所述水相含有磷酸或其盐，并且，在类似物质3及替吡嘧啶的保留时间内，乙腈相对于流动相整体的比例为流动相整体的5～20容量％。特别优选的是，流动相包含乙腈以及水相所述水相含有磷酸或磷酸二氢钠，并且，在类似物质3及替吡嘧啶的保留时间内，乙腈相对于流动相整体的比例为流动相整体的7～15容量％。可在高效液相色谱法的流动相中添加离子对试剂，可使用上述离子对试剂。优选为烷基磺酸钠，更优选为碳原子数4～12的烷基磺酸钠，特别优选为庚磺酸钠。高效液相色谱法的流动相的流速没有特别限定，优选为0.5～2.0mL分钟，更优选为0.6～1.5mL分钟，特别优选为0.7～1.3mL分钟。利用高效液相色谱法测定源自替吡嘧啶的类似物质时，类似物质2、3、6及替吡嘧啶能够各自分离即可。各类似物质的保留时间根据条件的不同而不同，彼此之间保留时间之差为0.5分钟以上即可。从替吡嘧啶或其盐中检测源自替吡嘧啶的类似物质时，可使用利用高效液相色谱法的方法。优选为使用下述高效液相色谱法的方法：所述高效液相色谱法中，在类似物质3及替吡嘧啶的保留时间内，有机相为流动相整体的5～20容量％。更优选为利用下述高效液相色谱法的方法：所述高效液相色谱法中，有机相包含乙腈，并且，在类似物质3及替吡嘧啶的保留时间内，乙腈为流动相整体的5～20容量％。更优选为利用下述高效液相色谱法的方法：所述高效液相色谱法中，流动相包含乙腈以及水相所述水相含有磷酸或磷酸二氢钾，并且，在类似物质3及替吡嘧啶的保留时间内，乙腈为流动相整体的5～20％。更优选为利用下述高效液相色谱法的方法：所述高效液相色谱法中，流动相包含乙腈以及水相所述水相含有磷酸或磷酸二氢钾，并且，在类似物质3及替吡嘧啶的保留时间内，乙腈为流动相整体的7～15％。更优选为利用下述高效液相色谱法的方法：所述高效液相色谱法中，流动相包含乙腈以及水相所述水相含有磷酸二氢钾，在类似物质3及替吡嘧啶的保留时间内，乙腈为流动相整体的7～15％，并且，使在测定时间中的有机相与水相的比例的变化为流动相整体的5％以下。更优选为利用下述高效液相色谱法的方法：所述高效液相色谱法中，流动相包含乙腈以及水相所述水相含有磷酸二氢钾，在类似物质3及替吡嘧啶的保留时间内，乙腈为流动相整体的7～15％，使测定时间中的有机相与水相的比例的变化为流动相整体的5％以下，并且，使用1-庚磺酸钠作为离子对试剂。如上所述，通过本发明的方法，能够从曲氟尿苷或其盐中对源自曲氟尿苷的类似物质进行分离并检测。另外，通过本发明的方法，能够从替吡嘧啶或其盐中对源自替吡嘧啶的类似物质进行分离并检测。另外，利用本发明的方法，能够将源自曲氟尿苷及替吡嘧啶的各类似物质分别地进行分离、检测。因此，通过在含有曲氟尿苷或其盐、以及替吡嘧啶或其盐的组合物的生产管理中应用本发明，由此可得到上述类似物质的含量得以降低的组合物。如前文所述，关于类似物质1和类似物质4，存在有在高效液相色谱法中的保留时间成为非常接近的值的趋势。另外，关于类似物质3和曲氟尿苷，也存在有在高效液相色谱法中的保留时间成为非常接近的值的趋势。因此，涉及上述类似物质的分离的发明特别有用。例如，根据本发明，可得到含有曲氟尿苷或其盐、以及替吡嘧啶或其盐的复方制剂，其特征在于，实质上不含有上述类似物质例如类似物质4。另外，根据本发明，可得到含有曲氟尿苷或其盐、以及替吡嘧啶或其盐的复方制剂，其是包含上述类似物质例如类似物质4的复方制剂，且所述类似物质例如类似物质4的含量质量为复方制剂中所含有的曲氟尿苷总体的0.05质量％以下。该实施方式中，该复方制剂中的该类似物质例如类似物质4的含量质量的下限没有特别限定。因此，本发明中，可以将上述类似物质例如类似物质4用于含有曲氟尿苷或其盐、以及替吡嘧啶或其盐的复方制剂的品质管理例如类似物质的含量管理调节。此外，根据本发明，也可以将上述类似物质例如类似物质4用作对含有曲氟尿苷或其盐、以及替吡嘧啶或其盐的复方制剂中的杂质进行检测时的标准品。另外，根据本发明，也可提供上述类似物质例如类似物质4的制造方法，其特征在于，从含有曲氟尿苷或其盐、以及替吡嘧啶或其盐的复方制剂中进行分离。可认为上述发明的效果不仅适用于类似物质4，而且也同样适用于类似物质1～3及5、6。实施例基于以下的试验条件实施高效液相色谱法的测定。·检测器：紫外分光光度计波长为210nm·色谱柱：在内径4.6mm、长15cm的不锈钢管中装入5μm的液相色谱用十八烷基甲硅烷基化硅胶色谱柱·柱温：40℃·流速：0.6～1.0mL分钟·流动相：记载于各实施例·梯度：记载于各实施例要使用高效液相色谱法进行测定的试样按照下述方式制备。将曲氟尿苷、替吡嘧啶盐酸盐以使得曲氟尿苷的浓度成为约1mgmL且替吡嘧啶盐酸盐的浓度成为约0.5mgmL的方式溶解于组成与各测定条件下使用的流动相相同的溶液中，进行适当稀释，将所得溶液作为试样。实施例1色谱柱：InertsilODS-4，GLSciences公司制流动相：将1.4g磷酸二氢钠二水合物及0.9g的1-庚磺酸钠溶解于900mL水中，添加磷酸将pH调节为2.7。向该液体中添加100mL甲醇，将其作为流动相。测定结果示于表1。由此，确认到曲氟尿苷的保留时间为12.0分钟，并确认到替吡嘧啶的保留时间为19.6分钟。另外，确认到类似物质1的保留时间为6.8分钟，类似物质4的保留时间为7.6分钟，类似物质3的保留时间为11.0分钟，类似物质2的保留时间为15.3分钟。另外，确认到类似物质5的保留时间为3.1分钟。由此确认到：是类似物质1和4能够分离、且类似物质3和曲氟尿苷能够分离的测定条件。另外，关于检测出的各类似物质，与另行购入或合成的各类似物质的保留时间一致，由此确认到是显示类似物质1～6的结构的化合物。实施例2色谱柱：InertsilODS-4，GLSciences公司制流动相：将1.5g磷酸二氢钠二水合物及0.9g的1-庚磺酸钠溶解于900mL水中，添加磷酸将pH调节为2.7。向该液体中添加100mL甲醇，将其作为流动相。测定结果与实施例1相同。实施例3色谱柱：InertsilODS-4，GLSciences公司制流动相：将1.4g磷酸二氢钠二水合物及1.0g的1-庚磺酸钠溶解于900mL水中，添加磷酸将pH调节为2.8。向该液体中添加100mL甲醇，将其作为流动相。测定结果与实施例1相同。实施例4色谱柱：InertsilODS-4，GLSciences公司制流动相：将1.4g磷酸二氢钠二水合物及0.9g的1-庚磺酸钠溶解于900mL水中，添加磷酸将pH调节为2.7。向该液体中添加95mL甲醇，将其作为流动相。测定结果与实施例1相同。实施例5色谱柱：Wakosil-II5C18RS，和光纯药制流动相：将1.4g磷酸二氢钠二水合物及0.9g的1-庚磺酸钠溶解于900mL水中，添加磷酸将pH调节为2.7。向该液体中添加100mL甲醇，将其作为流动相。测定结果与实施例1相同。实施例6色谱柱：Wakosil-II5C18RS，和光纯药制流动相：将3.1g磷酸二氢钠二水合物及2.0g的1-庚磺酸钠溶解于2000mL水中，添加磷酸将pH调节为2.7。向950mL该液体中添加50mL甲醇，将其作为流动相。测定结果如下，确认到曲氟尿苷的保留时间在21.0分钟～23.0分钟之间，并确认到替吡嘧啶的保留时间在41.0分钟～43.0分钟之间。另外，确认到类似物质1的保留时间在9.0分钟～10.0分钟之间，类似物质4的保留时间在8.0分钟～9.0分钟之间，类似物质3的保留时间在15.0～17.0分钟之间，类似物质2的保留时间在28.0分钟～30.0分钟之间。实施例7色谱柱：Wakosil-II5C18RS，和光纯药制流动相：将1.25g磷酸二氢钾及1.01g的1-庚磺酸钠溶解于920mL水中，添加80mL乙腈，将其作为流动相。测定结果如下，确认到曲氟尿苷的保留时间为8.4分钟，并确认到替吡嘧啶的保留时间为12.2分钟。另外，确认到类似物质1的保留时间为6.1分钟。实施例8色谱柱：InertsilODS-3，GLSciences公司制流动相：将1.88g的1-庚磺酸钠溶解于1860mL水中，加入140mL乙腈，添加磷酸将pH调节为2.7。测定结果如下，确认到曲氟尿苷的保留时间为13.1分钟，并确认到替吡嘧啶的保留时间为24.7分钟。另外，确认到类似物质1的保留时间为8.6分钟，类似物质3的保留时间为10.3分钟，类似物质2的保留时间为17.1分钟。实施例9色谱柱：Wakosil-II5C18RS，和光纯药制流动相：取1.01g的1-庚磺酸钠，加入水而使其为1000mL。向850mL该液体中添加150mL甲醇，添加磷酸将pH调节为2.7。测定结果如下，确认到曲氟尿苷的保留时间在8.0～10.0分钟之间，并确认到替吡嘧啶的保留时间为14～17分钟之间。另外，确认到类似物质3的保留时间为6.3分钟。实施例10以使替吡嘧啶盐酸盐的浓度成为约0.8mgmL的方式将替吡嘧啶盐酸盐溶解于水乙腈混合溶液23:2中，进行适当稀释，将所得溶液作为仅含有替吡嘧啶的试样。色谱柱：Wakosil-II5C18RS，和光纯药制；或InertsilODS-3，GLSciences公司制流动相：将1.25g磷酸二氢钾及1.01g的1-庚磺酸钠溶解于920mL水中，添加80mL乙腈，将其作为流动相。测定结果如下，确认到替吡嘧啶的保留时间为9.1分钟。另外，确认到类似物质3的保留时间为5.2分钟，类似物质2的保留时间为7.0分钟，类似物质6的保留时间为7.7分钟。由此确认到：是类似物质2、3、6及替吡嘧啶能够分离的测定条件。

权利要求：1.用于检测源自曲氟尿苷的类似物质及源自替吡嘧啶的类似物质中的一方或两方的方法，所述方法包括将含有曲氟尿苷或其盐、以及替吡嘧啶或其盐的试样供于高效液相色谱法的步骤，所述高效液相色谱法中使用包含有机相及水相的流动相。2.如权利要求1所述的方法，其中，所述类似物质为选自由下述类似物质1～5组成的组中的至少一种：类似物质1：三氟胸腺嘧啶；类似物质2：2-亚氨基吡咯烷；类似物质3：5-氯-6-{2-氧代吡咯烷-1-基甲基}嘧啶-2,4-1H,3H-二酮；类似物质4：2’-脱氧-5-甲氧基羰基尿苷；类似物质5：5-羧基尿嘧啶。3.如权利要求2所述的方法，其中，所述类似物质包含类似物质3，并且，类似物质3和曲氟尿苷在高效液相色谱法中的保留时间相差1.0分钟以上。4.如权利要求2或3所述的方法，其中，在类似物质1～5、曲氟尿苷及替吡嘧啶的保留时间内，有机相相对于流动相整体的比例均为7～15容量％。5.如权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，所述有机相包含甲醇。6.如权利要求1～5中任一项所述的方法，其中，水相包含磷酸或其盐或者它们的混合物。7.如权利要求2～6中任一项所述的方法，其中，在类似物质1、3、4及曲氟尿苷的保留时间内的有机相相对于流动相整体的比例中，最大值与最小值之差为流动相整体的5容量％以下。8.如权利要求1～7中任一项所述的方法，其中，流动相的pH为2.0～5.0。9.如权利要求1～8中任一项所述的方法，其中，流动相包含1-庚磺酸或其盐。10.2’-脱氧-5-甲氧基羰基尿苷类似物质4，其用于含有曲氟尿苷或其盐、以及替吡嘧啶或其盐的复方制剂的品质管理。11.2’-脱氧-5-甲氧基羰基尿苷类似物质4，其用作检测含有曲氟尿苷或其盐、以及替吡嘧啶或其盐的复方制剂中的杂质时的标准品。12.2’-脱氧-5-甲氧基羰基尿苷类似物质4的制造方法，其特征在于，从含有曲氟尿苷或其盐、以及替吡嘧啶或其盐的复方制剂中进行分离。

百度查询： 大鹏药品工业株式会社 源自曲氟尿苷及/或替吡嘧啶的类似物质的检测方法

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