申请/专利权人：北京化工大学

申请日：2020-03-20

公开（公告）日：2024-03-26

公开（公告）号：CN113493797B

主分类号：C12N15/74

分类号：C12N15/74;C12N1/21;A61K39/02;A61P31/04;C12R1/01

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.26#授权;2021.10.29#实质审查的生效;2021.10.12#公开

摘要：本发明提供了一种利用贝氏柯克斯体质粒缺失突变体制备抗原的方法。本发明的贝氏柯克斯体质粒缺失突变体是通过构建CBUA0037或CBUA0038基因敲除的pQGK穿梭质粒，再将其导入贝氏柯克斯体出发菌株中，利用质粒不相容原理，得到质粒缺失的突变体。所得到的突变体细菌感染能力和毒力减弱，可广泛用于实验室研究和抗原制备。

主权项：1.一种不含有任何质粒的贝氏柯克斯体质粒缺失突变体的构建方法，包括：1制备改造的穿梭质粒；2将所述改造的穿梭质粒导入贝氏柯克斯体出发菌株当中，传代培养，得到所述贝氏柯克斯体质粒缺失突变体；其中步骤1包括：制备含有全部QpH1同源序列区的穿梭质粒pQGK，敲除其中的CBUA0037或CBUA0038基因序列，得到改造的穿梭质粒pQGKΔCBUA0037或pQGKΔCBUA0038；所述改造的穿梭质粒pQGKΔCBUA0037或pQGKΔCBUA0038的具体构建方法为：穿梭质粒pQGK为模板，采用SEQIDNO.20SEQIDNO.21或SEQIDNO.22SEQIDNO.23所示的引物对PCR扩增，分别得到CBUA0037或CBUA0038敲除的DNA片段，将PCR产物以NheI和XhoI酶切，与同样酶切的pQGK质粒用DNA连接酶连接，得到穿梭质粒pQGKΔCBUA0037或pQGKΔCBUA0038；其中步骤2包括：将改造的穿梭质粒pQGKΔCBUA0037或pQGKΔCBUA0038通过电转化法导入贝氏柯克斯体出发菌株中。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 北京化工大学 一种利用贝氏柯克斯体质粒缺失突变体制备抗原的方法

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